毛细管电泳激光诱导荧光法优化量子点-转铁蛋白偶联体系及用于细胞标记（原版论文）.pdfVIP

第41卷 分析化学 (FENXIHUAXUE) 研究报告 第5期 2013年 5月 ChineseJoum~ ofAnalyticalChemistry 725—73l DOl：10．3724／SP．J．1096．2013．20888 毛细管电泳激光诱导荧光法优化 量子点一转铁蛋 白偶联体 系及用于细胞标记 梅 芳 赵新颖 2 张 璐 屈 锋 (北京理工大学生命学院，北京 100081) 。(北京市理化分析测试中心，北京 100089) 摘 要 利用毛细管电泳激光诱导荧光 (CE—LIF)表征了偶联剂N一羟基硫代琥珀酰亚胺 (NHS)及 NHS和 1一(3-二甲氨基丙基)一3一乙基碳二亚胺盐酸盐 (EDC)混合偶联剂对 CdTe量子点活化效果的差异，优化了 CdTe与转铁蛋白(Trf)的偶联条件 ，比较了CdTe—Trf，CdTe．BSA偶联物及CdTe量子点对 Hela细胞的标记效 果。结果表明：NHS活化后的量子点性能优于混合偶联剂EDC—NHS。31．2~mol／LTrf与CdTe形成的偶联物 CdTe—Trf对 Hela细胞 的标记效果最佳。CdTe—Trf在 4℃孵育 20min可快速标记在 Hela细胞的表面；在 37℃孵育7h后，可进入 Hela细胞内。说明所制得的CdTe—Trf偶联物具有 Trf的生物功能，它可通过特异性 识别并结合细胞膜表面的Trf受体而转入 Hela细胞。而CdTe．BSA偶联物的标记不具特异性，CdTe则不能 用于Hela细胞的标记。 关键词 毛细管电泳一激光诱导荧光 (CE—LIF)；量子点；转铁蛋白；偶联；细胞标记 1 引 言 转铁蛋 白(Trf)是脊椎动物体中一种非血红素结合铁的 一球蛋 白，可与细胞膜上的Trf受体结合，内 吞化形成内吞小体。在特定信号介导下，Trf可以通过释放铁离子，转移出细胞膜外。由于恶性肿瘤细 胞过度表达 附 受体 ，因此，通过标记 可进行肿瘤细胞的识别、诊断和治疗研究¨2J。量子点作为一 种新型荧光材料，近年来在生物成像研究中快速发展，特别是在细胞可视化研究方面 。量子点用 于细胞标记一般需将量子点与靶蛋白偶联，再通过靶蛋 白结合在细胞膜或进入胞 内显示量子点的荧光， 由此进行靶蛋白在细胞膜及胞 内的定位及成像分析。因此靶蛋白与量子点的偶联体系的构建是量子点 生物成像应用的基础 。 本研究选取Tff为靶蛋 白，通过其与细胞膜上的Trf受体结合，进而转运靶蛋 白．量子点的偶联物。 目前，量子点与蛋 白质的偶联多采用生物素亲和素法、共价法及静电吸附法等。蛋 白质与量子点偶联 时，二者的混合比例决定偶联产物的质量以及生物功能化的效果。在量子点与蛋白质的偶联反应中建 立高效、快速、低成本方法进行表征，对于偶联体系的优化，提高偶联效率非常必要。本研究利用毛细管 电泳激光诱导荧光法 (CE．LIF)的高效、快速、高灵敏和样品用量少等优势，对Trf与量子点CdTe偶联的 方法和条件进行快速优化，并将得到的CdTe．Trf偶联物不经分离而直接用于Hela细胞标记。通过激光 共聚焦显微镜进行标记效果的成像观察。实验结果表明，CdTe-Trf偶联物具有Trf的生物功能，并能特 异性识别细胞膜表面的Trf受体，在其介导下可转运到Hela细胞 内，分布在胞质中。CE．LIF法也适用 于其它荧光纳米材料的表面功能化效率表征，包括偶联剂种类的选择和反应 比例的优化、偶联产物的性 质表征等，具有一定的通用性。 2 实验部分 2．1 仪器与试剂 BeckmanP／ACETMMDQ毛细管电泳仪 (美国Beckman公司)，配备 LIF检测器，32Karatso,ware (Version510)工作站；LeicaTCSSP5激光共聚焦显微镜(德国Leica公司)。 2012_09_o3收稿 ；2012-12—30接受 本文系国家 自然科学基金 (Nos20875009)，国家重点基础研究发展计划 (No．2012CB0603)资助 E—m