萘酰亚胺—多胺缀合物2A体外抗肿瘤作用机制的研究.pdfVIP

2A, A Novel naphthalimide-polyamine Conjugate, Anti-tumor effects and mechanisms research in vitro A Dissertation Submitted to the Graduate School of Henan University in Partial Fulfillment of the Requirements for the Degree of Master of Medicine By Chen Ying Supervisor: Prof. Xie Songqiang Jun,2013 摘 要 实验目的: 多胺是一类广泛存在于组织细胞内的天然的胺类物质，肿瘤的快速生长有赖于细胞 内的多胺含量的大幅增长,远远超过其他正常组织细胞，而天然多胺可以作为一种载体通 过多胺转运系统进入细胞内。研究证明，在共价多胺链上缀合上一个细胞毒类药物，也 能被转运至细胞内，而发挥高选择性的抗肿瘤作用。萘酰亚胺类化合物对 DNA 有良好 的嵌入性能，肿瘤细胞与正常细胞的 DNA 存在差异性，可以起到一个靶向作用。本文 对新型的萘酰亚胺-多胺缀合物 2A 的抗肿瘤活性进行了研究，并探讨其作用机制。 实验方法： 以人肝癌细胞HepG2 为研究对象，先通过基因转染把 Akt1 基因转入 HepG2 细胞 内，通过细胞生长能力检测，克隆形成检测，细胞运动能力检测来研究 Akt1 基因对细 胞的作用。通过 MTT 法来检测 2A 的抗肿瘤活性，通过AO/EB/ Hoechst 33342 ，PI/Hoechst 33342，RH123/ Hoechst 33342 ，Lyso-Tracker Red/ Hoechst 33342,荧光染色法检测 2A 对 细胞的凋亡的影响；通过 transwell 小室实验，研究 2A 对细胞迁移和侵袭的影响；通过 免疫印迹法来检测 Caspases 家族，Bcl-2 家族，细胞色素 c，MMPs 家族等相关的蛋白 的表达，并对其相互关系进行了分析。 实验结果： 转染 Akt1 的HepG2 细胞与未转染的HepG2 细胞相比，细胞生长，增殖，运动能力 都有所提高。通过 2A 对两种细胞处理，发现都有生长抑制作用，对 HepG2 细胞的 IC50 值是（12.03±0.21）µM，对 HepG2-Akt1 细胞的 IC50 值是（19.68±1.54）µM。转染的 HepG2 肝癌细胞对于药物有更好的耐受，并且凋亡呈时间剂量依赖性。通过 transwell 小室的迁移和侵袭实验发现 2A 可以抑制肝癌细胞的迁移和侵袭，并呈现时间剂量依赖 性。通过染色观察2A 会诱导肿瘤细胞发生凋亡。免疫印迹实验结果表明2A 引起Caspases 家族的活化，细胞色素 c 的表达增多，Bcl-2 家族参与了凋亡的过程，VEGF 蛋白的下调， 侵袭相关的 MMPs 家族的成员MMP-2 ，MMP-9 的下调，E-cadherin 蛋白的上调，都参 与了迁移和侵袭的过程。2A 还参与诱导肝癌细胞发生自噬。 结论： Akt1 基因对细胞的增殖，迁移，侵袭有促进作用，化合物 2A 对于肝癌细胞有明显 I 的抑制作用，并能诱导发生凋亡，对 自噬以及迁移和侵袭也有一定作用。 关键词：萘酰亚胺-多胺缀合物，抗肿瘤，Akt1 ，凋亡，迁移和侵袭 II ABSTRACT Objective: Polyam