《荧光RPA技术检测转基因水稻科丰6号2016年论文》.pdfVIP

分子植物育种，2014年，第 12卷，第5期，第 875—880页 MolecularPlantBreeding，2014，Vo1．12，No．5，875—880 研究报告 ResearchReport 荧光 RPA技术检测转基因水稻科丰 6号 徐潮 t李亮 ，2金芜军 ，z宛煜嵩 1中国农业科学院生物技术研究所，北京，100081；2农业部转基因植物用微生物环境安全监督检验测试中心(北京)，北京，100081 通讯作者，wanyusong@caas，cn 摘 要 目前转基因作物检测通常使用PCR检测方法，PCR检测耗时较长且需要精密控制温度循环的仪 器，不适于现场检测。本研究应用重组酶聚合酶等温扩增技术(recombinaseploymeraseamplification，RPA)， 根据转基因抗虫水稻科丰 6号插入连接区整合序列设计筛选了一套可用于RPA检测的引物及探针组合，建 立了转基因抗虫水稻科丰6号及其衍生品种转化体特异性荧光RPA检测方法。研究结果表明本方法可稳定 特异检出样品中500个拷贝的靶标分子，利用实时荧光检测简化了检测程序，使检测可在 10~20min内完 成，与常规PCR检测需要数小时相比极大地缩短了检测时间。使用锂电池驱动的便携式扩增检测仪，对于野 外转基因现场检测具有极大的应用价值。 关键词 RPA，等温扩增，科丰6号，转基因检测 Event--specificReal--timeRPADetectionofTransgenicRiceKefeng6 XuChao LiLiang1,2JinWujun1,2WanYusong12 1BiotechnologyResearchInstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，BeOing，100081；2InspectionandTestingCenterforEnvironmental RiskAssessmentGeneticallyModifiedPlant—relatedMicroognaism (Beijing)，MinistryofAgriculture，Beijing，100081 Correspondingauthor，wnayusong@caas．cn DOI：10．13271~．mpb．012．000875 Abstract GM cropsdetectioncommonlyusesPCRmethodcurrently．Ittakestoolongandneedsthermalcycling instrumentswithaccuratetemperaturecontrol，SOitisnotsuitableforfieldtesting．Inthisstudy，event—specific detectionmethodofrtransgenicinsectresistancericeKefeng6anditsderivatesbasedonreal—timefluorescent recombinaseploymeraseamplification(RPA)wasestablished．Accordingtotheintegrationjunctionsequenceof Kefeng6，wedesignedandscreenedasetofRPA primersandprobescombinationwhichfitofrRPA assays．The resultsshowedthat500copiesofthetargetmoleculesinsamplescouldbedetectedstablelyandspecificallybythe method．Themehtodcanfinishdetectionin10to20min，simplifyingthetestprocedurebyreal—timefluorescence detection．Detection timewasrgeatly shortenedcomparingwiththeconventionalPCR detectionwhichneeded severalhour s．Ithasrgeatapplicationvalueforfieldtransgenicdetectionusinglithium battery-poweredportable apparauts． Keywords RPA，Isothermalamplification，Kefeng6，GM cropsdetection 进入 21世纪，全球转基因作