《西尔斯山羊草（Aegilops searsii）α-醇溶蛋白编码基因的克隆及原核表达2016年论文》.pdfVIP

山东农业大学学报(自然科学版)，2015，46(3)：321-325 V0L．46NO．32015 JournalofShandongAgficulturalUniversity(NaturalScienceEdition) doi：10．39698．issn．1000-2324．2015．03．00 — — — — — 刘国娟 ，马 信 ，尹华燕 ，孙 鑫 ，杜旭烨 ，王宏伟 ，李安飞 ，陈呈涛2，孔令让 1．山东农业大学农学院／作物生物学国家重点实验室，山东 泰安 271018 2．山东省新泰市天宝镇农业技术推广站，山东 新泰 271200 摘 要 ：醇溶蛋白是小麦加工品质的重要影响因素，主要决定面团的粘性和延展性。根据酸性条件下迁移率的不同， 可将醇溶蛋 白分为a．，B．，Y．，co．醇溶蛋白。c．【醇溶蛋白占贮藏蛋白的 15％~30％，是含量最丰富的一类贮藏蛋白， 同时， 醇溶蛋白中含有一些致敏性的毒性多肽。克隆西尔斯山羊草a．醇溶蛋白基因，并进行序列分析，通过构建原 核表达载体，使其在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白，并通过切胶纯化法，获得纯度较高的目的蛋白。根据u-醇溶蛋白 基因编码区保守序列设计引物，通过PCR扩增克隆得到a．醇溶蛋白基因并进行序列分析。将 目的基因KC421089连 到表达载体pEASY-E1上，在大肠杆菌BL21(DE3)中经 IPTG诱导表达，获得表达的融合蛋白。通过切胶纯化法， 获得纯度较高的目的蛋白。从小麦近缘植物西尔斯山羊草 (Aegilopssearsii)中首次克隆了7个c￡．醇溶蛋白编码基因， 它们的编码区长度分布在 849~954bp之间，可编码 282~317个氨基酸。通过与已发表的其它物种的c-【醇溶蛋白氨 基酸序列进行多重比对分析，发现这些基因都具有q．醇溶蛋白编码基因典型的结构特点，同时还存在着碱基的缺失、 插入以及 SNPs。在克隆目的基因的基础上，本研究还通过大肠杆菌体外表达和切胶纯化方法，获得了纯度较高的目 的蛋白，实现了该基因的表达。克隆了7个a．醇溶蛋白基因序列，登录号为KC421089的基因可在原核系统中成功表 达，并通过切胶纯化法获得 目的蛋白，为进一步利用西尔斯山羊草改良小麦加工品质奠定了基础。 关键词 ：a．醇溶蛋 白；西尔斯山羊草；序列分析；原核表达 中图法分类号：s5 文献标识码：A 文章编号：1000—2324(2015)03-0321—05 Cloning and ProkaryotieExpression ofa-Gliadin Genesfrom A e~qlopssearsll LIU Guo-juan1，MA Xin1．YIN Hua．yan1，SUN Xin1，DU Xu．ye1，WANG Hong-wei，LIAn-fei，CHEN Cheng-tao2，KONGLing—rang木 1．AgronomyCollege,ShandongArgiculturalUniversity~StateKeyLaboratoryofCropBiology,Taian271018，China 2．AgriculutreTechnologyGeneralizationStationofTianbaoTownXintaiCfShandongProvince,Xintai271200，China Abstract：Gliadinsarethemajorinfluencefactorsofwheatprocessingqualiyt,whichdeterminedoughextensibility．Onhte basisofhteelectrophoreticmobilitybyacidicpolyareylamidegelelectrophoresis，gliadincallbesepraatedinto旺-，p-，丫一and ∞一gliadin．Amongthem． gliadinsarethemostabundnatna daccountedfor15％~ 30％ ofthewheatstorageprotenis．nO the ohterhand．a·gliadinscancaus