AMPK激活剂metformin和AICAR抑制紫外线辐射诱导皮肤癌的机制的研究.pdfVIP

·中文论著摘要· 诱导皮肤癌的机制研究 ．▲』．—JL 刖 吾 性损伤如皮肤癌及光老化。目光中紫外线诱导的DNA损伤是导致皮肤癌发生的一 个重要因素，同时在皮肤癌细胞中发现，调控细胞增殖、分化和凋亡的特异性基因 出现与紫外线损伤相关的变异。根据日光中紫外线波长的不同，可将其分为3 种：UVA，UVB和UVC，造成生物损害的紫外线主要是波长短，能量较高的uvB(波 长290—320nm)，是导致DNA损伤的主要类型。目前已证实一些原癌基因和抑癌 基因由于紫外线引起的DNA损伤而发生变异。UV诱导产生皮肤癌是一个复杂的 过程，涉及到许多细胞和分子水平上的变化，同时还与DNA的修复作用相关。 肿瘤的发生、发展及远处转移是一个复杂的过程，事实上，恶性增生多数是由多 种因素和多条信号转导通路失调促成的。磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)是体 内的能量调节器，AMPK激活后可促进葡萄糖重吸收、糖酵解和脂肪酸氧化，减 少脂肪酸、胆固醇和蛋白质的合成，储存能量，被称为“细胞能量调节器，近 年来关于该通路在肿瘤的发生发展中的作用研究很多，发现其在多种肿瘤中表达 胞实验及构建SKH—l无毛小鼠紫外线致皮肤癌模型研究该药物对紫外线辐射诱导 皮肤癌的预防和治疗作用，并阐明其机制。 目 的 human knockdown epidermalkeratinocytes，NHEK)及AMPKwide—type(WT)和AMPK (KD)鼠胚胎成纤维细胞(m01lse emb删omc 要是UVB)辐射后AMPK通路相关分子改变，及DNA损伤修复改变，并通过构 建紫外线致SKH．1无毛小鼠皮肤癌模型研究这两种药物对紫外线辐射诱导皮肤癌 的预防和治疗作用，并探讨其作用机制。 材料与方法 24，48，72h后，MTS方法检测细胞存活曲线。 照射前1 照射后处死小鼠，剥离皮肤提取DNA；SlotBlot方法检测UVB照射后不同时间 DNA片段CPD及6．4PP修复情况。 3、动物实验：动物培养遵守芝加哥大学动物保护和使用机构条例，分为2部 分，第一部分，预防辐射致皮肤癌模型：SKH．1无毛小鼠，分为4组，对照组， 照射(100rrd／cm2)三次，连续25周，实验组小鼠每次照射前后背照射区域皮肤 涂AICAR或metformin。每周记录小鼠体重变化及皮肤变化，记录肿瘤发生时间， 及肿瘤数目。第二部分，辐射致皮肤癌治疗模型：SKH．1无毛小鼠，每周UVB 照射(100mJ／cm2)三次，至17周，按照生成肿瘤大小及数目随机分为单纯照射 相应处理。继续每周记录肿瘤数目，大小变化。 关分子变化及DNA修复相关蛋白变化。 5、HE染色观察照射后各组小鼠皮肤上皮增生增厚情况。 6、免疫组化方法检测照射后小鼠正常皮肤及肿瘤组织增殖因子鼬67表达情 况。 7、采用Prism soRware，San 5(GraphPad Diego，CA)统计软件分析，所有数 2 据用3次独立实验的均值4-标准误表示，采用t检验及方差分析，尸0．05为有统 计学意义。 结 果 1、为了证实AMPK信号通路在皮肤癌发生发展中的作用，我们用Western 线诱导小鼠皮肤癌细胞，及紫外线照射后O．5，6，24h正常小鼠皮肤、未照射小鼠皮 肤中的表达，我们发现AMPK信号通路在皮肤肿瘤中被抑制，紫外线照射短时间 内0．5和6h时被激活，24h后被抑制。 2、激活AMPK通路抑制紫外线诱导的小鼠皮肤肿瘤形成。我们用AMPK信 号通路激活剂AICAR及metformin处理SIⅢ．1无毛小鼠，westernBlot结果显示 及metformin的紫外线照射组与单纯紫外线照射相比，用药组延迟紫外线诱导小