应用荧光实时定量PCR+方法检测重组慢病毒滴度及其感染效率.pdfVIP

第 卷第 期 生命科学研究 13 5 Vol．13 No．5 年 月 2009 10 Life Science Research Oct. 2009 年 生 命 科 学 研 究 2009 应用荧光实时定量PCR 方法检测重组慢病毒滴度 及其感染效率 马海燕， 方彧聃， 张敬之* （上海交通大学医学院，上海市儿童医院上海市医学遗传研究所，中国上海200040） 摘 要： 慢病毒载体已经广泛应用于动物模型中基因治疗的研究和转基因动物的制备， 而准确地测定重组慢 病毒的滴度和感染效率是其关键步骤 通过荧光实时定量 的方法定量分析重组慢病毒的颗粒数以及病 ． PCR 毒的活性滴度， 并以 报告基因的方法作为对照来验证定量 方法的准确性 研究结果显示，应用荧光 GFP PCR ． 实时定量PCR 法与 GFP 报告基因法测定得到的病毒活性滴度成正相关， 而且前者可以更加准确地测定病毒 滴度和病毒感染效率． 关键词： 慢病毒载体； 荧光实时定量PCR ； 病毒滴度； 整合拷贝数； 感染效率 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） Q331 A 1007-7847 2009 05-0394-05 A Novel Method for the Determination of Recombinant Lentiviral Titer and Infectivity by qRT-PCR MA Hai-yan ，FANG Yu-dan ，ZHANG Jing-zhi* （School of Medicine ，Shanghai Jiaotong University ，Shanghai Children ’s Hospital ，Shanghai Institute of Medical Genetics ， Shanghai 200040 ，China） Abstract ：Lentiviral vector is being widely used in the study of gene therapy in animal models and in generating transgenic animals. However ，determination of lentiviral particles and their infectivity is essential before their being used. Such a requirement can be accurately achieved by qRT-PCR. Refered by infectious units got from GFP reporter assay ，it showed a positive correla