心肌细胞缺氧和景天苷干预的差异性表达蛋白的silac定量蛋白质组学分析及线粒体相关的机制研究.pdf

IUlII I IIIIIII I IIIIIII 目 录 中文摘要……………………………………………………………………1 英文摘要……………………………………………………………………4 英文缩写……………………………………………………………………7 研究论文 心肌细胞缺氧和红景天苷干预的差异表达蛋白的SILAC定量 蛋白质组学分析及线粒体相关的机制研究 前言……………………………………………………………………9再U舌…………………………………………………………………… 材料方法………………………………………………………………10 结果……………………………………………………………………24 附图……………………………………………………………………28 附表……………………………………………………………………44 讨{念……………………………………………………………………50 结j念……………………………………………………………………53 参考文献………………………………………………………………54 综述红景天苷对心肌的保护机制及信号通路的研究进展……………60 致谢…………………………………………………………………………68 个人简历……………………………………………………………………69 万方数据 中文摘要 心肌细胞缺氧和红景天苷干预的差异表达蛋白的SILAC定量蛋 白质组学分析及线粒体相关的机制研究 摘 要 目的：心肌细胞缺氧过程中始终伴随着可能诱导细胞损伤(坏死、凋 亡等)的能量代谢变化，这些变化在心血管疾病进程方面起着至关重要的 有研究表明SAL具有抗心肌缺氧、保护心脏功能等作用。本研究旨在通 量蛋白质组学方法分析缺氧组和SAL干预组心肌细胞蛋白表达差异，分． 析线粒体三羧酸循环相关酶和凋亡相关的线粒体信号途径分子的表达变 化，探讨SAL对缺氧心肌的保护作用机制。 方法：以H9c2大鼠心肌细胞为靶细胞，使用不同剂量CoCl2刺激 浓度刺激细胞，筛选最佳的SAL保护浓度，对照组加入等量的DMEM高 糖培养基。采用稳定同位素标记细胞(SILAC)结合质谱的方法筛选缺氧 Database 组、红景天苷预处理组和对照组的差异表达蛋白，运用The for Annotation，Visualization andIntegrated 测细胞凋亡比例；荧光探针检测细胞内Ca2+浓度变化；化学发光分析法检 测细胞内ATP浓度变化；WesternBlot检测琥珀酰辅酶A连接酶l Cleaved—caspase·3、caspase-9、Bcl一2和Bax蛋白表达。。 结果： 1 CoCl2对H9c2细胞的半数抑制浓度为500 mnol／L：根据文献以 500 CoCl2 700 h，对照组加入等量的DMEM培养基。 gmol／L。分别刺激H9c2细胞24 MTT实验结果发现：CoCl2300，400，500，600和700gmol／L组细胞存活率 明显受到抑制，与对照组相比有统计学差异泸0．05)，细胞活性随CoCl2 万方数据 中文摘要 浓度增加呈现递减趋势，进一步实验发现CoCl2对H9c2细胞的半数抑制 浓度为500 pmol／L，故选取500 pmol／L为后续实验中CoCl2的刺激浓度。 2常氧状态下SAL对H9c2细胞无明显增殖作用：根据文献以SALf1， 10，1