鸡源沙门氏菌的离鉴定、耐药性检测及耐药基因定位.pdfVIP

摘要 鸡源沙门氏菌的分离鉴定、耐药性检测及耐 药基因定位 微生物专业硕士研究生赵连生 指导教师王豪举副教授 摘 要 鸡沙门氏菌病是引起鸡感染的常见传染病之一，分为鸡向痢、鸡伤寒和鸡副伤寒。这三 种沙门氏菌病对养鸡业的危害极人。随着抗生素在动物感染和人类保健中的大量使用，近20 年来沙fJ氏菌对抗菌约物的耐约性在稳定的增长，特别是沙门氏菌多重耐约的不断出现，已 经成为公共卫生和农产晶安全关注的热点。本试验旨在对重庆地区分离剑的10株鸡源沙门氏 菌进行鉴定的基础上分析其耐药谱、血清学分布、耐药质粒携带状况，并对其耐约基冈进行 了定位研究。 1、用常规方法从重庆地区疑似沙f J氏菌病鸡分离剑10株沙门氏菌，通过生化反应对病 原菌进行了初步鉴定；采川玻片凝集法，用30种沙门氏菌属诊断血清对分离菌进行了血清型 分群，并根据沙门氏菌砌谢基冈序列设计一对引物，对分离菌砌倒基冈进行了PCR扩增。 出了373bp人小的目的片段。 2、根据NCCLS推荐的标准，用K．B法检测了分离菌对21种抗菌约物的敏感性。并用碱 裂解法提取10株分离菌的质粒，通过电泳分析了其质粒携带状况，并分析了其耐药表型与质 粒图谱之间的关系。结果表明：分离菌均具有较强的耐约性，对所试21种抗菌约物的耐药率 达24％．71％。对青霉素、阿莫两林、红霉素、四环素、利福平等临床常川抗生素已经完全耐 药，对复方新诺明、氨苄青霉素、氯霉素、环丙沙星和诺氟沙星的耐约也比较普遍，分别达 粒的存在，质粒携带率为60％。S1有3种人小质粒(36kb、15kb、1．4kb)；S4有4种人小 质粒(36kb、6．8kb、4．9kb、2．2kb)：S6有3种人小质粒(36kb、2．8kb、2．2 kb)；S8有2 kb、1．8 种人小质粒(15 kb)；S9有5种人小质粒(36kb、15kb、6．8kb、3．6kb、1．6kb)：S10 有1种人小质粒(36 kb)。10株分离菌的耐约表型与其质粒携带状况之间不存在明显的对应 关系。 I 两南人学硕I‘学化论文 3、用变温--SDS法对携带质粒的卤株进行质粒消除，通过提取质粒电泳来检测质粒消除 状况。对质粒消除后的菌株与未消除的菌株进行配对药敏试验，确定其携带质粒所编码的耐 药基因。结果6株携带质粒的菌株在交替培养5次后，携带质粒均被完全消除，消除率达100 ％：质粒消除后菌株对大部分抗生素由耐约变为敏感，表明质粒是其耐药基冈的土要载体， 配对约敏试验表明s1株由质粒介导的耐药基冈有阿荚西林、庆人霉素、红霉素、四环素、环 丙沙星、诺氟沙星、氯霉素7种，I‘i总耐药基冈的47％；S4株由质粒介导的耐药基冈有阿莫 西林、红霉素、四环素3种，一i总耐药基冈的60％；S6株由质粒介导的耐药基因有阿莫两林、 庆人霉素、红霉素、四环素、环丙沙屉、氧氟沙星、诺氟沙星、左氧氟沙星、氯霉素9种， 占总耐约基冈的60％；S8由质粒介导的耐约基冈有阿莫两林、红霉素、四环素、环丙沙星、 氧氟沙星、氯霉素6种，占总耐约基冈的60％；S9株由质粒介导的耐药基冈有阿莫西林、红 霉素、四环素、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、左氧氟沙星、复方新诺明、氯霉素9种， 占总耐药基冈的75％；$10株由质粒介导的耐药基冈有阿莫两林、庆大霉素、红霉素、四环 素、环丙沙星、氧氟沙星、氯霉素7种，占总耐药基冈的64％。 关键词：沙门氏菌耐药性质粒图谱质粒消除 Resistance And DetectionResistantGeneLocationOf SalmonellaFrom