一种测量婴儿脂肪营养新方法—采集婴儿口腔粘膜细胞.pdf

二、大会发言 ·儿科· 1、一种测量婴儿脂肪营养的新方法 一采集婴儿口腔粘膜细胞 上海交通大学医学院附属上海新华医院，上海市儿科医学研究所200092 陈菲张伟利蒋明华何稼敏 必需脂肪酸对婴儿营养十分重要，尤其一些长链多价不饱和脂肪酸(LcPuFA)，如二十二碳六烯酸(DHA) 和花生四烯酸(AA)是婴儿脑和视网膜的重要组成成份。以往我们要了解婴儿体内的脂肪营养状况主要是通过采 集婴儿的m液标本来进行测定。由于婴儿采血比较困难，而且是创伤性的，家属往往不容易接受。尤其要对某地区 婴儿进行较大样本的营养调查时，就需要有一种简单、方便、易行的方法。最近我们通过采集婴儿口腔颊粘膜细胞 的方法来测定婴儿体内的脂肪酸成份。为了解测定婴儿口腔颊粘膜细胞能否反映婴儿体内脂肪的营养状况，我们将 口腔颊粘膜细胞中脂肪酸的测定结果与血浆和红细胞膜中的测定结果进行比较。现将婴儿口腔粘膜细胞中脂肪酸的 测定方法，以及与血浆和红细胞膜中的测定结果比较如下： 对象与方法 1．对象 从2005年9月1日至12月30日采集了在上海交通大学附属新华医院住院的新生儿共32例，日龄O～30天， 下标准： (1)无窒息抢救病史。 (2)婴儿未进行静脉营养，无输JlIL及影响肠道营养吸收的病史。 (3)其母亲在孕期尤糖尿病，结核病，高脂血症或已知对婴儿脂肪代谢造成影响的围产期疾病。 2．仪器和设备 硅熔胶(SP2330)，采用氢焰离子化检测器(FID)。数据处理：采用浙大智达N2000色谱数据工作站进行数据分析， 采用内标法计算峰面积。 3．要几口腔颊粘膜标本的采集 使用台湾林哥婴儿用品有限公司生产的适用于新生儿和婴儿的乳牙刷，该婴儿刷可戴在操作者的手指上伸入婴 儿口腔内采集婴儿颊粘膜标本。当符合条件的新生儿需采血进行其它实验聿检查时，同时留取约lml的血液标本。 在采血当天同时采集婴儿口腔颊粘膜标本。为了避免婴儿口腔中奶汁对测定的干扰，婴儿口腔颊粘膜细胞的采集在 ·39· 进食前进行。并且在采集前用3～5ml的生理盐水清洁婴儿口腔。操作时由助手扶住新生儿头部，用消过毒的婴儿 专用婴刷轻刮婴儿口腔粘膜表面，每刮2～3下后将婴刷放在生理盐水中洗涤，如此反复约3～4次，然后再采集另 一侧的口腔颊粘膜细胞。两侧可交替进行。将采集的颊粘膜细胞收集在清洁的玻璃试管中，在4C下3000转／分， 离心lO分钟，将离心后的细胞沉淀物在．80C冰箱中保存。 血标本采集：将采集剑的婴儿血标本放在含有EDTA的抗凝管中，4℃下6000转／分，离心10rain分离血浆和 红细胞，将血浆置于．80℃冰箱冷藏待测。红细胞用生理盐水反复洗3次(加入10ml生理盐水，4C下4000转／分离 心lO分钟，将上清液弃去，重复3次)。再加入2ml蒸馏水使红细胞溶血，然后在4C下4000转／分离心l小时， 用移液管将上清液吸去，留在试管底部的乳白色红细胞膜沉淀物在氮气下吹干，然后放入-80℃冰箱冷藏待测。 4．脂肪酸成份的测定： 采用直接酯化一步法对上述各种标本中的总脂肪酸进行抽提和酯化。将脂肪的抽提物通过气相色谱仪进行脂肪 酸成份的分析。 5．统计学方法 所有实验数据用均值±标准差表示，采用SPSSll．5版统计软件。差异分析用单因素方差分析，P0．05表示差 异有显著统计学意义。LSD检验进行组间两两比较。当数据不满足方差齐性检验时，则进行LOG转换后再进行方 两比较，结果用计算后所得的校正后的检验水准o【’分析。两两相关分析采用Pearson相关检验。若满足相关则进一 步用Fishers检验回归方程的显著性。 结 果 1．各组标本中各脂肪酸含量的情况，根据各脂肪酸百分含量的高低排序，列出含量占前8位的脂肪酸。由表 中可见各组中占前几位的均是16和18碳的长链脂肪酸。颊粘膜细胞组与血浆组前四位的脂肪酸排序相同，分别是 18：l，16：0，18：2和18：0。在红细胞膜组中显示出较长链的脂肪酸百分含量较高。 2．3组脂肪酸的组成情况在n．3系脂肪酸中18：3n-3和22：6n．3在各组间均有显著性差异。口腔颊粘膜细 此外，研究发现口腔颊粘膜细胞中的单不饱和脂肪酸含量最高(38．86_+2．51)。总的n．6系脂肪酸的含量在血 3．显示口腔颊粘膜细胞中DHA和AA