《高级食品化学》实验设计指导.doc

实验一 研究植物活性成分槐米芦丁 一、实验内容简介 ⑴不同提取方法的提取效果比较：索氏抽提法、回流提取法、超声波辅助提取法等； ⑵最佳提取条件优化； ⑶大孔吸附树脂纯化实验； ⑷槐米芦丁的检测方法比较：比色法和高效液相色谱法； ⑸芦丁的水解实验。 二、实验原理 芦丁的分子式为 C27 H30 O16 ·3H2 O，相对分子量为610.51，其性状为淡黄色结晶粉末或无晶形粉末，气味上无臭无味，口感上有苦味，熔点176~178℃，略溶于水（1g/1000mL），能溶于热水及乙醇，遇光易变质，需在阴凉处保存。芦丁为黄酮苷，遇酸水解成槲皮素和芸香糖。芦丁分子中具有较多的酚羟基，显弱酸性，易溶于碱液中，酸化后又能析出沉淀。另外芦丁3,3,4,5,7-五羟基黄酮-3-O- 芸香糖甙, 它与芸香酶共存于槐米中，芦丁在槐米晾晒、洗涤、粉碎、提取过程中易受芸香酶作用而发生水解，因此，提取前及提取过程中灭酶或降低酶活是十分必要的。了解其分子式和理化性质对于正确选择提取方法，提高芦丁提取的效率和得率至关重要。 三、不同提取方法的研究比较 （一）索氏提取法 1．原理：芦丁微溶于水，易溶于甲醇，在沸甲醇中的溶解度为1g/7mL，槐米在沸甲醇中提取，将芦丁溶出，然后用水萃取即可得到芦丁粗品。 2．试剂仪器：甲醇（分析纯），定性滤纸，索氏抽提器，研钵 3．操作：称取10.0g粉碎的干燥槐米粉末，用滤纸包好，放入索氏抽提器，用甲醇抽提，直到抽提回流液无色，回收溶剂，烘干得到粗提物。 （二）碱提酸沉法 1．原理：芦丁分子中具有较多的酚羟基，显弱酸性，易溶于碱液中，酸化后又能析出沉淀。 2．试剂仪器：石灰，3%硼砂，盐酸，pH试纸，研钵。 3．操作：称取10.0g粉碎的干燥槐米粉末，加50倍水煮沸，在搅拌下缓缓加入石灰乳调pH至8~9，加入3%的硼砂，在保持pH条件下，微沸数分钟，随时补充失去的水分，然后保持50℃~60℃的提取温度抽滤20min~30min,反复提取3次，得提取液，在适当的温度下用盐酸调pH至4以下，搅匀，静置6~8h，抽滤，水洗至洗液呈中性，60℃干燥，得芦丁粗品。 （三）超声波辅助提取法 1．原理：利用超声波的空化效应、湍流效应、微扰效应、界面效应和聚能效应等物理作用,加速被破碎物细胞壁的破裂,促进细胞内含物的溶出,从而实现天然产物低温、快速提取的目标。 2．试剂仪器：饱和硼砂，亚硫酸氢钠，氢氧化钠，pH试纸，超声波发生器，离心机，研钵。 3．操作：称取10.0g粉碎的干燥槐米粉末按1:15的料液比加入水，同时加入0.35~0.45g饱和硼砂、0.50~0.60g亚硫酸氢钠，用氢氧化钠溶液调pH为8~9，搅拌均匀，放入功率为1000W的超声波发生器（20kHz），室温超声处理10min。离心、过滤得滤液。滤渣中再按1:15的料液比加入水，同时加入0.35~0.45g饱和硼砂、0.50~0.60g亚硫酸氢钠，用氢氧化钠溶液调pH为8~9，搅拌均匀，再次室温下超声波处理10min，离心、过滤。合并2次滤液，以盐酸调pH至2~3。结晶析出时，抽滤，干燥得到芦丁粗品。 四、芦丁标准曲线的绘制 精密称取芦丁标准品200mg，置100mL容量瓶中，加甲醇70mL，置水浴上微热使溶解，凉至室温时，加甲醇至刻度，摇匀，精密吸取10mL，置100mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀即可（每1mL中含无水芦丁0.2mg。精密称取上述标准溶液0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0mL。分别置于25mL容量瓶中，各加水至6mL，加5%（w）亚硝酸钠溶液1mL，使混匀，放置6min，加10%硝酸铝溶液1mL溶液摇匀，放置6min，加4%(ρ)氢氧化钠溶液10mL，再加水至刻度，摇匀，静置15min,然后于500nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，芦丁浓度为横坐标绘制标准曲线。 芦丁提取率的测定 ：取干燥芦丁粗品约1g，精密称定，加甲醇溶解后移入100mL容量瓶，再加甲醇洗涤并入容量瓶，加甲醇至刻度，摇匀，精密称取10mL至100mL容量瓶，加水至刻度，摇匀。精密称取3mL至25mL容量瓶中，按照标准曲线制备项下的方法，自“加水至6mL”起依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的浓度，计算即得槐米中芦丁的含量。 （C—0.0024）×25 芦丁含量（%）= ×M2×100 9.1759×M1×M M——槐米干粉，g； M1——称取的干燥芦丁粗品，g； M2——总的干燥芦丁粗品，g； C——从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的浓度，mg/mL。 五、大孔吸附树脂纯化实验 原理：大孔吸附树脂是具有大孔网状结构的高分子吸附剂，其对芦丁的吸附机理是依靠树脂与芦丁之间的范德华力等作