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1、基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的,又叫做DNA重组技术。变异类型——基因重组 2、基因工程的基本工具限制酶、DNA连接酶、运载体(常见的是质粒 条件?) 3、限制酶的功能:能够识别特定的脱氧核苷酸序列,并在特定位点将两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开,因此具有专一性。切割时不能破坏目的基因、标记基因。 4、酶 DNA连接酶:连接两个双链DNA片段形成磷酸二酯键 ; 限制酶:催化磷酸二酯键水解,形成DNA片段; DNA聚合酶:单个脱氧核苷酸之间形成磷酸二酯键, 解旋酶:断开氢键 RNA聚合酶:单个核糖核苷酸之间形成磷酸二酯键 DNA酶:催化磷酸二酯键水解,形成脱氧核苷酸 5、基因工程的基本操作程序是:①目的基因的获取 ②基因表达载体的构建 ③将目的基因导入受体细胞 ④目的基因的检测与鉴定 7、获取目的基因的方法有:从基因文库中获取、利用PCR技术扩增目的基因,人工合成,逆转录法 9、基因工程的核心是基因表达载体的构建(限制酶+DNA连接酶处理质粒和目的基因)。 基因表达载体的组成是:启动子+目的基因+终止子+标记基因+复制原点。 启动子:位于DNA上,其上有RNA聚合酶识别和结合的位点,驱动转录 起始密码:位于mRNA上,开始翻译 标记基因的作用:鉴定受体细胞中是否含有目的基因,从而将含有目的基因的细胞筛选出来。 常用的标记基因是抗生素抗性基因(培养基中

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