一种高灵敏度高特异性检测重金属Hg2的比色生物传感方法.pdfVIP

第 30 卷 第 5 期 核 技 术 Vol. 30, No.5 2007 年 5 月 NUCLEAR TECHNIQUES May 2007 一种高灵敏度、高特异性检测重金属Hg2+ 的 比色生物传感方法 刘兴奋 武海萍 李玉兰 李晴暖 王丽华 （中国科学院上海应用物理研究所 上海 201800 ） 摘要 巯基修饰的可以与 Hg2+特异性结合的 DNA 序列（poly-T ）被共价连接在纳米金颗粒表面，构成纳米捕 获探针。当检测到 Hg2+ 时，不同纳米金颗粒表面的 DNA 发生 Hg2+介导的配对形成准双链结构，纳米金颗粒 之间的距离被拉近，导致纳米金颗粒的团聚，颜色由红色变成蓝紫色。检测前，Hg2+浓度用电感耦合等离子 质谱仪（Inductively coupled plasma mass spectrometry ，ICP-MS ）进行标定，以排除汞盐潮解引起的浓度误差 对检测灵敏度的影响。用这种基于纳米金和 DNA 的生物传感方法检测 Hg2+ ，检测限最低可达 5μmol/L ；对 Ca2+ 、Mg2+等其它 8 种二价金属离子进行对照实验的结果表明，该方法不仅具有灵敏度高、选择性好的特点， 而且方法简单、快速、成本低、便于普及。 关键词 生物传感器，纳米金颗粒，Hg2+ ，比色法，电感耦合等离子质谱仪 中图分类号 TP212.3 长期以来，重金属污染受到人们的广泛关注， 的特异性作用，设计了一种新型生物传感方法，通 工业活动导致的汞、镉、铅、铬等重金属污染的生 过检测两端标记的 DNA 探针结合 Hg2+前后产生的 物毒性非常显著，给人类健康和环境造成极大危害。 荧光变化实现对 Hg2+ 的特异性检测。该方法具有较 全世界的汞年排放量约 1.5 万吨，主要来源于汞矿、 高的特异性，可排除实际样品体系中大多数离子的 冶金、氯碱工业、电器工业和矿物燃料的燃烧[1] 。 干扰，检测限可以达到 4×10-8mol/L 。但其需进行 这些无机汞进入大气循环和水体循环系统后，在生 DNA 双标记，且依赖于荧光仪器，检测成本仍然较高。 物体内转化成有机汞（甲基汞、乙基汞），毒性大大 近年来，纳米材料的发展为解决这一问题提供 增强。最终在食物链的各个环节中累积，给人类的 了新的思路。纳米金颗粒具有优异的光学性质、电 健康和生存带来巨大威胁[2-5] 。因此，环境汞的监测 学性质、化学活性和生物兼容性，在生物领域得到 十分重要。 广泛应用[2-5] 。研究表明，纳米金溶液的颜色与纳米 [12,13] 目前汞检测的主要方法是光谱法，包括原子（吸 金颗粒的间距以及纳米金聚集体的大小有关 。 [6] 收、发射、荧光等）光谱方法以及分光光度法等 。 纳米金颗粒的间距若明显超过其平均直径，纳米金 近年来，原子光谱与 ICP 技术的联用，提高了检测 呈分散状态，宏观上表现为红色；该间距若小于平 的灵敏度，拓宽了检测的线性范围，而 ICP-MS 使 均直径，则纳米金易团聚，呈聚集态，宏观上表现 检测更加灵敏，数据分析更加方便。但是，此类仪 为紫色到蓝色。利用纳米金的这种性质,可设计一系 器较为昂贵，在大多数实验室中的推广应用因此受 列生化反应以改变纳米金颗粒间的距离，从而实现 到限制。除光谱法外，以冠醚类小分子为代表的化 对靶物质的检测。1996 年，Mirkin 研究组实现了巯 学传感方法也有一定的发展，但尚有灵敏度低、可重 基修饰 DNA 在纳米金颗粒表面的组装，制备成纳 [7-10] 。 [14] 。并通过 DNA 与靶物 复性差等不足之处，检测的可靠性和准确性不高 米金-DNA 复合纳米结构 分子生物学技术的快速发展，为利用生物大分 质的结合，改变纳米金的分散-聚集状况，以此建立 子（蛋白质、DNA 等）的特异性检测各种靶物质提 了一系列超高灵敏检测 DNA 和蛋白质的生物检测 [11]利用 Hg2+与 DNA [14-16] 。 供了有利条件。最近，Ono 等 方法，构建了基于纳米金比色方法的纳米检测平台 —————————————— 国家自然科学基金（No. 座机电话号码 ，座机电话号码 ），上海市纳米专项（No. 0452nm068 ）资助 第一作者: 刘兴奋，女，1975 年出生，在成都理工大学获得材料学硕士学位。现为中国科学院上海应用物理研究所无机化学 专业在读博士。研究方向：生物传感器 通讯作者：王丽华 收稿日期：2006-12-26 ，修回日期：2007-03-30 468 核 技 术 第 30 卷 鉴于此，我们开展了一系列与纳米金有关的生物检 T-Hg2+-T 结构。我们先将一段 poly T 的DNA 序列 测，包括基于纳