棉铃虫卵内半胱氨酸蛋白酶的分离纯化、氨基酸序列研究及其cDNA文库的构建.pdf

——一些叁查兰登曼主鲨苎 致 谢 本论文是在我的导师赵小凡教授及王金星教授的悉心指导下完 成的。在我的学习和实验过程中，他们无论是在理论上还是在操作 上都起到了高屋建瓴的指引和示范作用。他们踏踏实实的做人态度、 兢兢业业的科研作风和灵括而不失创意的学术思想使我深受感动和 启发，这必将使我受益终生l在论文的完成过程中，许多策略的产 生和困难的解决都凝聚了他们的心血。对于他们的无私帮助和深切 关怀，谨在此表示我衷心的感谢和崇高的敬意l 同时，在这三年的学习和生活过程中，陈留存、邓怿、齐洪荚、 刘瑶、徐夏莲、王来元、李照民、李斐雪、王来城、胡业广、宋欣 欣同学也给了我很多的支持和帮助．没有他们的关心，我的论文也 很难顺利完成。 、 感谢我的母亲、师长、朋友及所有支持、关心和帮助过我的人 们! 棉铃虫卵内半胱氨酸蛋白酶的分离纯化、氨基酸 序列分析及cDNA文库的构建 摘 要 f昆虫卵内蛋白酶在昆虫胚胎发育过程中降解卵黄蛋自质。供给胚 胎发育必需的氮基酸，对胚胎发育具有重要的作用．从60年代至今 已对家蚕、果蝇、蝗虫和蚊子等数种昆虫卵内蛋白酶进行了研究， 所报道的蛋白酶分属于半胱氨酸蛋白酶类、丝氨酸蛋白酶类和天冬 氨酸蛋白舅类．祷铃虫是严重危害棉花生产的害虫。研究棉铃虫卵 内存在何种蛋白酶、蛋白爵性质、受何种因子抑制、括化及调控过 程等分子生物学过程及机理．为杀卵农药研制提供了理论依据．) 本论文在前人工作的基础上，采用阴离子交换层析法。从拂铃虫 卵母细胞中分离到一种半肤氮酸蛋白酶，SDS电泳显示为一条 带。分子量约为29KDa，原位水解电泳表明其具有蛋白水解活性． 氨基酸序列测定进一步确认此酶属于半胱氨酸蛋白酶中的组织蛋白 酶B类．使用提纯后的酶蛋白制备了兔抗血请。用于免疫印记检嚣 蛋白酶的组织分布及将来的文库筛选工作． f利用一步法从棉铃虫成虫脂肪体中提取出总RNA，然后采用亲 和层析的方法分离出mR．NA．反转录成双链oDNA．两端接上连接子 后，与表达载体Zgtll相连接，包装后构建成了棉铃虫脂肪体的eDNA 文库。为筛选基因奠定了基础。 关键词：棉铃虫半耽氨酸蛋白酶离子交换层析cDNA文库 2 ———————————型墅堡主墼 ． PURIFICATIONAND PARTIAL AMINOACID OFA SEQUENCING CYSTEINE PROTEINASEFROM EGGSAND OFCDNA LIBRARY FROMTHE COTTON BOLL ARMlGERA WORM，ltELICOVER●|A ‘ Abstract Insect rolesin egg proteinasesplay important toamino of