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硅酸二钙涂层离子溶液促进人骨髓问充质干细胞成骨分化及其机制的实验研究 中文摘要 硅酸二钙涂层离子溶液促进人骨髓间充质干细胞成骨 ． 分化及其机制的实验研究 中文摘要 第一部分人骨髓间充质千细胞的分离、培养及鉴定 【摘要】目的 从人骨髓中分离培养hMSCs并对其细胞生物学特性进行观察。方法 无菌条件下在健康志愿者髂棘处穿刺抽取骨髓，运用密度梯度离心法分离骨髓单个核 细胞，培养在含10％胎牛血清的DMEM培养基中，再利用贴壁筛选法纯化获得人骨 髓间充质干细胞，对其进行细胞生长和形态学的观察，流式细胞仪检测第3代hMSCs 细胞表面标志并分析细胞周期。 结果所分离培养出的细胞形态呈长梭形，漩涡状 生长，纯度随传代次数增加而提高，8代以后细胞扩增速度变慢，细胞形态也发生改 阴性。第1、3、5代hMSCs生长曲线呈S形，无显著性差异，均经历潜伏期、对数 增殖期和停滞期三个时期。培养的第3代骨髓间充质干细胞中处于G0／G1期的细胞 比例约为77．42％，处于S+G2／M期的细胞比例为22．58％左右。结论采用密度梯 度离心结合贴壁筛选培养法可获得纯度较高且增殖活性强的人骨髓间充质干细胞，是 一种简单、经济、有效的分离纯化骨髓间充质干细胞的方法。 【关键词】间充质干细胞；骨髓；生物学特性；细胞培养 第二部分硅酸二钙涂层离子溶液对人骨髓间充质干细胞 增殖及凋亡的影响 【摘要】目的通过硅酸二钙涂层离子溶液与人骨髓问充质干细胞复合培养，试图阐 明硅酸二钙涂层离子溶液对人骨髓间充质干细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。 方 法将等离子喷涂的硅酸二钙涂层钛片浸泡在DMEM培养基中，37。C下静置72小时， 电感耦合等离子体原子发射光谱仪(ICP)测定培养基中Si、Ca、P离子浓度的变化。 中文摘要 硅酸二钙涂层离子溶液促进人骨髓间充质干细胞成骨分化及其机制的实验研究 结论 硅酸二钙涂层离子溶液能促进人骨髓间充质干细胞的早期增殖，其促细胞增殖的能力 可能与培养基中较高的硅离子浓度有关，通过加速骨髓间充质干细胞周期的转换而达 到的。 【关键词】硅酸二钙；骨髓间充质干细胞；增殖；细胞周期 第三部分 硅酸二钙涂层离子溶液促进人骨髓间充质干细胞 成骨分化的研究 【摘要】目的通过检测骨髓间充质干细胞成骨分化过程中特异性基因的表达，探讨 硅酸二钙涂层离子溶液对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响。 方法人骨髓间充质 对硝基苯磷酸盐法测定细胞内碱性磷酸酶(ALP)活性，茜素红S染色方法观察钙化 的基因表达情况。 Ⅱ 硅酸二钙涂层离子溶液促进人骨髓问充质干细胞成骨分化及其机制的实验研究 中文摘要 组钙化结节的数量和着色程度均较OS+DS一组明显增加，其他两组未见钙化结节形 成。在第4、7、14天时，成骨诱导组hMSCs成骨分化相关标志基因的表达量显著高 OS+DS-组。结论硅酸二钙涂层离子溶液自身能够在一定程度上诱导骨髓间充质干 细胞向成骨细胞分化；和成骨诱导剂协同，则促进钙沉积及骨髓间充质干细胞的成骨 分化。 【关键词】硅酸二钙；骨髓间充质干细胞；成骨分化；基因表达 第四部分硅酸二钙涂层离子溶液促进人骨髓间充质千细胞成骨 分化机制的研究 【摘要】目的探讨硅酸二钙涂层离子溶液促进人骨髓间充质干细胞成骨分化的可能 分子机制。 方法骨髓间充质干细胞分别培养在三组培养基(OS+DS一、OS+DS+、 OS+DS+／PD)中，以Western blot方法检测细胞内ERK的磷酸化表达情况；加入ERK 特异性抑制剂PD98059后，分别采用对硝基苯磷酸盐法、茜素红S染色方法测定碱 后10 min，随后磷酸化的ERK表达逐渐降低到基线水平。比较三组培养基作用10mill后 O．01)。结论硅酸二钙涂层离子溶液能够促进人骨髓间充质干细胞的成骨分化，