3种苹果潜隐性病毒一步多重RT—PCR检测体系的优化.pdfVIP

第 35卷第 4期 河 北 农 业 大 学 学 报 Vo1．35NO．4 2012年 7月 JOURNALOFAGRICULTURAlUNIVERSITY OFHEBEI Ju1．2012 文章编 号 ：1000—1573(2012)04—0051—07 3种苹果潜隐性病毒一步多重 RT—PCR 检测体系的优化 陈红霞， 邵建柱， 孙建设， 乔雪华， 曹晓凤 (河北农业大学 园艺学院，河北 保定 071000) 摘要 ：为建立更为快速准确 的苹果潜隐性病毒检测方法 ，以携带苹果茎沟病毒 (ASGV)、苹果褪绿叶斑病毒 (ACLSV)和苹果茎痘病毒(AsPV)的田间苹果成龄树为试材 ，设计合成了扩增 目的片段为 273bp(ASGV)、358 bp(ACLSV)和 432bp(ASPV)的3对特异性引物 ，并对影响RT-PCR体系的主要参数进行试验优化 。结果表 明：建立 的一步多重 RTPCR体系可以实现对 3种主要潜隐性病毒 的特异性检测 ；通过对 田间多个样 品的检测 验证 ，表 明该方法 的准确性和灵敏度都很高，并缩短 了单个样 品的检测时间，极大地提高了工作效率 。 关 键 词 ：苹果茎沟病毒 ；苹果褪绿叶斑病毒 ；苹果茎痘病毒 ；一步多重 RT—PCR 中图分类号 ：Q945．78 文献标志码 ：A Quickdetectionofthreeapplelatentviruses byone。’stepmultiplexRT--PCR CHENHong—xia，SHAO Jian—zhu，SUNJian-she，QIAO Xue-hua，CAO Xiao—feng (CollegeofHorticulture，AgriculturalUniversityofHebei，Baoding071000，China) Abstract：Inordertoestablish arapidandreliablemethodtodetectthreeapplelatentviruses， matureappletreesinfectedbyApplestemgroovingvirus(ASGV)，Applechloroticleafspot virus (ACLSV)andApplestem pittingvirus (ASPV)weretakenasmaterials，andthreesets ofspecificprimerswithfragmentsof273bp (ASGV)，358bp (ACLSV)and432bp (ASPV) wereamplificated．Somemain parametersaffecting theRT-PCR system weretested．There- sultsshowedthatone——stepmultiplexRT——PCR couldspeciallydetectthethreeapplelatentviru—— ses．Thesensitivityandapplicabilitywereverifiedbytestingmanysamplesfrom field．Thede— tectionofthethreeapplevirusesfrom a singlesamplecanbefinishedeffectivelyandcan im— provetheefficiencygreatly． Keywords：Applestem groovingvirus；Applechloroticleafspotvirus；Applesternpitting virus；one—stepmultiplexRT—PCR 收稿 日期 ：2012—02—10 基金项 目：国家现代农业产业技术体系 (ChinaAgricultureResearchSystem)