《LAMP实时浊度法快速检测肠出血性大肠杆菌O157的研究》.pdf

现代食品科技 ModernFoodScienceandTechnology 2014，Vo1．30，No．7 LAMP实时浊度法快速检测肠出血性大肠杆菌 0157的研究 李碧霞 ，游淑珠 ，邝筱珊 ，冯家望 ，tJ~t2 唐食明 ，成晓维 ，许喜林 ’ (1．华南理工大学轻工与食品学院，广东广州 510640)(2．珠海出入境检验检疫局技术中心，广东珠海 519015) 摘要：采用环介导等温扩增 (LoopMediatedIsothermalAmplification，LAMP)技术，利用实时浊度仪实时检测LAMP反应过程 中所产生的焦磷酸镁白色沉淀，实现对扩增反应全过程的监控，建立食品中肠出血性大肠杆菌 (EnterohemorrhagicEscherichiacoli， EHEC)O157的LAMP实时浊度法快速检测方法。针对EHECO157抗原基因rfbE的序列设计4条特异性LAMP引物。通过实时浊 度仪在恒温63℃下 1小时完成检测，对方法的特异性、灵敏度、稳定性进行了评价，并进行了食品样品添加试验以评价其应用于实 际样品的效果。结果显示，经优化后，该方法的最低检 出限为2．8×10CFUm／L，与PCR法灵敏度比较高100倍。样品添加试验能检 出的最低添加菌量为2．8x10CFU／25g(或mL)。LAMP实时浊度法具有快速、灵敏、特异性高、操作简便的优势，为食源致病菌快 速筛查提供了一种 良好的检测模式。 关键词：环介导等温扩增技术；实时浊度仪；大肠杆菌O157；检测 文章篇号：1673．9078(2014)7．268272 RapidDetectionofEnterohemorrhagicEscherichiacoliO157byLAM P Rea1．time rbidityM ethod LIBi-xia1~YOUShu-zhu2KUANGXiao．shan2FENG Jia-wang2WANG Xiao-yu，TANG Shi．ming2 , ， ， ， ， CHENGXiao-wei2XUXMin。 ， (1．SchoolofLightIndustryandFoodSciences，SouthChinaUniversityofTechnology,Guangzhou510640，China) (2．TheInspectionTechnicalCenterofZhuhaiEntry—ExitInspectionnadQuarantineBureau，Zhuhai519015，China) Abstract：Re~-timemonitoringofmagnesiumpyrophosphateproducedfromtheloop-mediatedisothermalamplification(LAMP) reactionwasachievedbyhteturbidimeter．FourspecificprimersweredesingedaccordingtohtesequencesofantigengenedbEofEHECO157． Detectionwascompletedat63 ℃ onthereal-timeturbidimeterin1h．Thespecificity,sensitiviyt,stabiliytofthemehtodwasevaluated． Resultsshowedthatafteroptimized，thelowestdetectionlimitwas2．8xlO。CFU／mL nad100timesmoreesnsitivehtna htePCR,andthe ， minimaladdingquantiytof2．8xlOCFU／25g(ormE)