急性高血氨攻击大鼠肝脏增殖与凋亡初步及研究.pdfVIP

摘要 急性性高血氨攻击大鼠肝脏增殖与凋亡的初步研究 研究生 高晓娟 导师 余祖江 郑州大学第一附属医院感染科 河南郑州450052 摘 要 背景 肝脏丰富的血液供应和独特的形态结构使其代谢极为活跃，在我们生命活 动中起着举足轻重的作用。血氨(bloodammonia，BA)主要来源于肠道产氨、肾脏 泌氨、肌肉产氨等，是正常体内代谢产物。氨对人体的毒性很大，机体不惜消 耗巨大能量，及时将氨转变成无毒或毒性小的物质排出体外，清除多余的氨来 保持体内含量稳定。肝脏是氨的主要代谢场所。 failure，HF)是临床常见的危急重症之一，其死亡率高达 肝衰竭(hepatic 70％一80％，多数患者死于多种并发症，包括肝性脑病、肝肾综合症、出血等。 然究其原因在于肝衰竭后，大量的肝细胞坏死和凋亡，肝细胞功能受损，“残存” 肝细胞不能满足身体需要而产生一系列功能紊乱，包括血氨升高，乳酸中毒， 血糖紊乱，吲哚水平增高等，其中以血氨升高最为引入注目。在临床治疗中我 们发现，在以“二次打击学说为底线，相同的抗病毒、维护肝功能等基础治 上，全程门冬氨酸鸟氨酸治疗可能延缓乙型肝炎病毒相关慢加急性肝衰竭的进 展，通过降低血氨水平可显著缓解肝脏损伤，有效促进肝细胞的解毒、分泌、 合成及转化功能，降低病死率，改善患者预后。在病毒和内毒素二次打击的基 础上，血氨等毒性物质在体内聚集，是否对肝衰竭后“残存的肝细胞功能造 成影响，目前尚不清楚。 研究显示血氨升高对机体组织细胞具有毒性作用。当肝脏严重损伤时，肝 细胞数量减少，必然导致体内代谢废物增加，血氨浓度增加，对脑神经组织损 摘要 害最明显。肝性脑病(hepatic 紊乱为基础的中枢神经系统功能失调的综合病征，其中以氨中毒学说的研究最 多。血氨在脑中主要通过星形胶质细胞的谷氨酰胺合成酶完成代谢，星形胶质 细胞是氨神经毒性的主要靶细胞，氨可以通过引起能量代谢、氧化应激、线粒 体通透性转换、GABA和GLU神经递质系统、细胞内信号转导以及水通道蛋白 4(AQP4)表达的改变、增加脑水肿、改变基因表达等，最终导致星形胶质细 胞对神经元的营养支持作用降低，引发肝性脑病。 然而血氨升高并不是对所有机体细胞都有毒性，研究显示氨对于不同来源 细胞的生长影响可以明显不同：在相同浓度的血氨作用下，293、HDF、Vero和 胞系较多细胞受到生长抑制，但HeLa、BHK细胞系生长存在明显的生长抑制， 血氨对细胞的影响具有明显细胞特异性。 通过探索我们采用特定的氯化铵溶液给大鼠特定时间的灌胃刺激，可造成 健康大鼠血氨明显升高，构建了急性高血氨模型。本文从细胞增殖周期及凋亡 的表达和定位，并采用TUNEL法观察两组肝脏组织凋亡情况，对急性高血氨攻 击后大鼠肝脏的变化进行初步研究，探索血氨升高对肝脏细胞的影响。 目的 通过构建急性高血氨大鼠模型，初步探索血氨对大鼠肝脏细胞的影响，为 肝衰竭可能的发病机制的研究提供理论依据，进一步为肝衰竭的治疗提供新的 途径和靶点 方法 ．给予健康大鼠10％氯化铵溶液．10ml／kg体重灌胃，每天给药两次，间隔8h， 连续30天。对照组给予健康大鼠生理盐水lOm／kg体重灌胃，每天给药两次， 间隔8h，连续30天。 2．实验方法：30天后采用心脏采血的方式收集高血氨组和对照组大鼠的血液 标本，立即检测血氨(BA)及丙氨酸转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移 Ⅱ 摘要 酶(AST)、直接胆红素(DBil)，同时取肝脏活组织标本制作蜡块，进行苏 鼠肝脏的表达，并采用TUNEL法对大鼠肝脏的凋亡情况进行检测。 3．统计学分析：采用SPSS17．0统计软件进行数据分析，计量资料以均数±标 准差(工±s)表示。高血氨组和对照组两组间数据比较采用两组独立样本的 相关。 结果 1．对照组及高血氨组大鼠给药后一般状况良好，无明显氨中毒症状，存活率为