His肽修饰的人干扰素γ的研制.docVIP

His肽修饰的人干扰素γ的研制 胡大强 (第三军医大学大坪医院野战外科研究所药剂科，重庆400042) 提 要：目的 为了便于人干扰素γ功能研究，制备6His修饰的人干扰素γ。方法 采用一步反向PCR扩增编码人干扰素γ的cDNA序列,克隆到质粒pUC19,测序鉴定正确后构建到pQE80L表达质粒中，经BamHI和HindIII双酶切后，行1.2% 琼脂糖凝胶电泳鉴定；利用SDS和Western blot检测表达的目的蛋白, Ni2+-NTA柱纯化蛋白，酶联免疫吸附测定纯化的目的蛋白。结果 一步反向PCR扩增得到编码人干扰素γ cDNA片段，测序结果正确,SDS和Western blot分析显示His修饰的人干扰素γ在大肠杆菌中获得了高效表达, SDS证实目的蛋白具有较高纯度，酶联免疫吸附测定显示目的蛋白具有高的生物活性。结论 成功制备了6His肽修饰的人干扰素γ。 关键词：干扰素γ；表达；蛋白纯化 Keywords: human interferon gamma; expession;protein purification 人干扰素γ（Human interferon gamma,huINFγ）具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节等作用[1]，临床上广泛使用。但在huINFγ的功能研究中，常需要对huINFγ进行定性或定量，一般使用huINFγ的单抗，采用酶联免疫法来定性或定量。Hi