创新设计2016高考生物一轮复习 第3单元整合提升课件 教科版选修3.pptVIP

1.限制酶选择时的两种特例 (1)限制酶具有特异性，一般情况下，不同限制酶切割形成的黏性末端不同。但也有不同限制酶处理后形成的黏性末端相同，可以用DNA连接酶进行连接。如G↓GATCC和↓GATC，识别的序列不同，但处理后形成的黏性末端相同。(2)一般情况下，用同一种限制酶分别处理质粒和目的基因，使其具有相同的黏性末端。但如果都用相同的两种限制酶分别处理，也可形成分别对应的相同黏性末端，例如目的基因的两端分别有BamH Ⅰ和HindⅢ的酶切位点，质粒上也有这两种酶的切点。如图所示： 2.限制酶选择的注意事项 (1)根据目的基因两端的限制酶切点确定限制酶的种类 ①应选择切点位于目的基因两端的限制酶，如图甲可选择PstⅠ。 ②不能选择切点位于目的基因内部的限制酶，如图甲不能选择SmaⅠ。 ③为避免目的基因和质粒的自身环化和随意连接，也可使用两种不同的限制酶分别切割目的基因和质粒，如图甲也可选择用Pst Ⅰ和EcoR Ⅰ两种限制酶(但要确保质粒上也有这两种限制酶的切点)。 (2)根据质粒的特点确定限制酶的种类 ①所选限制酶要与切割目的基因的限制酶相一致，以确保具有相同的黏性末端。 ②插入的目的基因的表达需要调控序列，用作载体的质粒的插入基因部位之前需有启动子，之后需有终止子，所以所选限制酶的切点应该“前有启动子，后有终止子”。 ③质粒作为运载体必须具备标记基因、启动子和终止子等，