高糖刺激大鼠系膜细胞氧化应激和炎症反应对Ⅳ型胶原生成影响.pdfVIP

中文摘要 高糖刺激大鼠系膜细胞氧化应激和炎症反应对IV型胶原生成的 影响 摘 要 目的：糖尿病肾病(Diabetic 管病变的肾脏特征性表现，是糖尿病患者的主要死亡原因之一，也是引起 终末。肾病(end renal stage 理改变是系膜细胞的增生及细胞外基质(extraceUular 分产生增加。DN发病机制复杂，目前尚未明确，然而，氧化应激和炎症 损伤被广泛认为是DN的重要机制，也被我们的前期实验所证实。 氧化应激已被认为是DN发生发展的共同通路。尽管内皮型一氧化氮 nitricoxide 合酶(endothelial oxide， nitric NO)，有保护肾脏的作用。但DM时，诱导型一氧化氮合酶(inducible oxide 的发病与进展。而超氧化物歧化酶(superoxide 通过减少ONOO。的生成，起到防治DN的作用。我们的前期研究也表明 DN的发生与进展，提示氧化应激是DN发生的关键。 炎症反应同样在DN的发生发展中起重要作用。作为主要炎症介质的 具有调节机体生理平衡，维持内环境稳定的作用。COX．2基因在炎症刺 激和其它类型组织损伤时可被诱导，表达明显增加。我们前期的研究表明， 可拮抗PGE2等的致炎效应，而PGl2生成的关键酶前列环素合酶 (prostacyclinsynthase，PGIS)，在炎症反应中起着重要的平衡作用。 亦有研究表明，内皮功能异常在糖尿病血管病变的发病中也起到关键 作用。内皮细胞损伤参与了DN发生发展的全过程。绝大多数内皮素．1 脏具有广泛的生物活性。ET是目前所知的最强的长效缩血管活性肽，能 中文摘要 产生持续的缩血管效应，在与血管病变有关疾病的发生发展中起着重要作 用。ET的活性受内皮素转化酶(endothelinconvertingenzyme，ECE)调节， DM时ECE活性的上调可导致ET升高。 在DM时，氧化应激、炎症反应、肾素．血管紧张素系统活性增加等共 growth 成份IV型胶原基因转录。IV型胶原分子由3条仅肽链组成，目前分离得到 的单肽链依其一级结构不同，可分为al(IV)型胶原链【简写为al(IV)】 、 型胶原基因转录，而Smad3敲除，可使糖尿病小鼠肾皮质IV型胶原的0【1 链不表达。 虽然已有研究表明，高糖刺激早期即可引起氧化应激、炎症反应等 的损伤性反应，但是在大鼠系膜细胞中，相关酶谱的变化，尚未有报道。 而高糖刺激大鼠系膜细胞所引起的早期反应，是否可激活的TGF．p通路， 从而导致IV型胶原的大量生成，尚未有系统研究。 本实验采用高糖培养大鼠肾小球系膜细胞，在不同时间点收集细胞， 相关酶谱的表达变化；RT-PCR检测高糖诱导不同时间点，大鼠肾小球系 膜细胞TGF．p1的表达，同时利用免疫荧光染色法动态观察大鼠肾小球系 膜细胞中Smad3的核转位情况，旨在探讨高糖诱导早期反应激活 胶原基因各0【链的表达情况。 方法： 1培养细胞 传代培养的大鼠肾小球系膜细胞接种于六孔板，10％胎牛血清低糖 中文摘要 胞同步化，细胞换液，10％胎牛血清高糖DMEM继续培养。在高糖DMEM 培养的不同时间点，终止培养，用于检测。 2总RNA的提取：Trizol法提取细胞总RNA。‘ 3 各链的表达。 4免疫荧光染色法观察Smad3的核转位。 结果： 1氧化应激相关的关键酶iNOS的表达在高糖刺激1小时时明显升高； eNOS表达量无变化；SOD的表达在刺激后明显降低。 2炎症反应相关的关键酶COX．2在高糖刺激0．3d,时内呈表达量逐渐 升高的趋势；COX．1、PGIS表达量无变化。，