鹅不食草抗肿瘤活性成分及质量分析的研究.pdfVIP

中 文 摘 要 鹅不食草 (Centipedaminima(L.)A.Br.etAscher.)系菊科(Compositae)石胡要 属植物，一年生甸甸状草本，生长于海拔300^-1400米的阴湿处。主产我国浙江、 湖北、江苏、广东等地，国外主要分布在印度和锡南岛，阿富汗、东亚、澳大利 亚和太平洋岛等地亦有分布。该药材收载于 《中国药典》(2000版一部)，具有 通鼻窍、止咳喘的功效，临床用于风寒头痛、慢性鼻炎等病症。现代药理研究表 明，鹅不食草具有抗菌、抗过敏、抗肿瘤等多种生理活性。作者对鹅不食草的物 质基础进行了研究，从中筛选出一个生物活性化合物 (短叶老鹤草素)，首次证 明其对多种肿瘤细胞具有很强的抑制作用。 本论文以水蒸气蒸馏法提取鹅不食草挥发油，然后用水煮醇沉法得到流浸 膏，从两个部分中共分离和鉴定了31个化合物。采用溶剂法和色谱法从流浸膏 中分离得到8个单体成分，通过UV,IR,NMR,MS等波谱技术鉴定了其中的 5个化合物，分别为短叶老鹤草素 ((1),棚皮素-3-甲醚 (1I),棚皮素-3,3f一二甲 醚 (111),3,3,5,5’一四甲氧基一反一X(IV)，2一异丙基一5一甲基一对苯二酚-4-氧一f3 -D-毗喃木糖昔 (V)e 采用GC-MS分析技术，从挥发油中分离出50个色谱峰，通过NIST质谱库 检索，鉴定了其中26个成分，分别为反式乙酸菊烯酷 (IX),磨香草酚 (X), 马榄烯(XI),(isocomene,XII),2,6,6一三甲基环己烯-1-磺乙酞苯 (XIII),4,11,11- 三甲基-8一亚甲基一双环一十一烷-4-烯(XIV),2一甲基一3一亚甲基一_7-仔一甲基-3一戊烯基)- 双环一庚烷 (XV),a一丁香烯 (XVI),5一甲基一2-(1-甲基乙基)苯乙酸酷 (XVII), 2,3,7一三甲基一2,6一辛二烯丙酸醋 (XVIII),异石竹烯 (XIX)等。其中，磨香草酚、 2一甲基-2,3-醋酸}s-5一甲基苯丙酸酷、5-甲基一2-(1甲‘基乙基)苯乙酸酷、1,3,5一三甲 基一1一乙烯基-4一己烯丁酸酷、2多，7一三甲基一2,6一辛二烯丙酸酩和 3,7一二甲基一丙酸 -2,6一辛二烯一1-醇等23种成分为首次从该植物中发现。 以人体抗肿瘤细胞系为筛选指标，用流式细胞技术作为检测手段，对鹅不食 草不同提取部位和单体化合物进行了抗肿瘤作用的筛选研究。药理试验表明，溶 剂法分离得到的乙醚提取物、乙酸乙酷提取物和超临界 COZ提取物具有明显的 杭肿瘤作用，对hela肿瘤细胞的抑制率分别为%.76%,87,25%,95.94%。从 乙醚部位分离和筛选到1个有效成分，经鉴定为短叶老鹤草素 (Brevilin),属愈 创木内酷型倍半菇类化合物。本试验研究首次证明该成分对胰腺癌、肝癌 BEL-7402、乳腺癌MDA-MB-231等癌细胞具有很强的抑制作用，504g/ml浓度 时，对肝癌细胞BEL-7402、乳腺癌细胞MDA-MB-231的抑制率均可达到90 以上;对胰腺癌细胞、肝癌细胞BEL-7402、乳腺癌细胞MDA-MB-231的IC50 值分X11为11.611g/ml,2.0ug/inl,3.611g/ml, 对鹅不食草的超临界C02提取物和水蒸气蒸馏的挥发油进行了比较研究，前 者抗肿瘤作用明显强于后者。采用GC-MS分析方法，对两种提取物进行了比较 分析。结果表明，两种方法得到的提取物中有11种成分相同，其中含量较高的 为反式乙酸菊烯醋、棕搁酸等。超临界C仇提取物经GC-MS分离到50个色谱 峰，通过NIST质谱库检索，鉴定了其中21个化合物，占总含量的64.37 ，含 量最高的成分为8,11一二烯一愈创木内醋-3-酮，相对含量 13.70 ，这种倍半菇类 成分多具有抗肿瘤活性;水蒸气蒸馏提取物经GC-MS分离到50个色谱峰，通 过NIST质谱库检索，鉴定了其中26个化合物，占总含量的84.65/o，含量最高 的成分为反式乙酸菊烯酷，相对含量39.76 ，这类成分一般不具有抗肿瘤活性。 这一研究结果与本论文药理试验结果十分吻合，从而阐明了超临界C02萃取物 和水蒸气蒸馏提取物抗肿瘤活性存在较大差异的原因。 在鹅不食草抗肿瘤活性成分研究的基础上，对该药用植物的性状、鉴别、检 查、含量测定等方面进行了系统研究，制定了较明确的质量标准。以其有效部位 为目标确定的薄层鉴别方法具有较强的专属性;以其抗肿瘤有效成分短叶老鹤草 素为对照品建立的含量测定方法，