16 组织工程.ppt

组织工程皮肤技术路线 构建步骤 （1）种子细胞与培养液 成纤维细胞：DMEM培养基、10%胎牛血清、青 霉素、链霉素等。 表皮角质形成细胞：DMEM+Ham F-12培养基、 表皮生长因子等。 （2）支架材料 聚羟基乙酸（PGA）。 （3）构建成纤维细胞-PGA复合物 酶法消化收集真皮成纤维细胞，接种在PGA上， 加入培养液培养。 （4）接种表皮角质形成细胞在前面的复合物 上，更换表皮角质形成细胞培养基培养5天左右。 （5）双层皮肤成熟 将复合物放在可渗透膜上，进行气-液界面培养， 促进表皮角质形成细胞的进一步分化。 再培养1周，形成含真皮和表皮两层结构的组织 工程化皮肤。 难题 ： 1.血管化：血管生成是指内皮细胞构筑的毛细血 管分支和伸展。血管生成有助于损伤组织的修复。 2.毛囊、汗腺等再生。所以美容慎用。 3.排异性。 我国人造皮肤2007年第四军医大学开发成功，进 入临床阶段。 * 第16章 组织工程 本章主要内容 1.组织工程及其三要素 2.组织工程技术路线 3.组织工程反应器 4.组织工程产品 本节主要问题 种子细胞、组织工程材料、影响因子 16.1 组织工程及其三要素 1. 定义 组织工程(Tissue Engineering) ：是利用生命科 学、医学、工程学原理与技术，单独或组合地利 用细胞、生物材料、细胞因子实现组织修复或器官 再生的一门技术。 20世纪80年代提出概念。 Joseph P. Vacanti John Homans Professor of Surgery at Harvard Medical School Robert Langer Professor of Chemical and Biomedical Engineering at MIT 2. 组织工程三要素 1.种子细胞 2.支架材料 3.影响因子 （一）种子细胞 1.定义 种子细胞(Seed cell)：是组织修复或再生的细胞材料。 2.来源 （1）干细胞：胚胎干细胞、成体干细胞。 （2）功能细胞：组织来源的体细胞。 3.特点 容易获得和体外培养、遗传稳定。 4.问题 （1）同种、异种细胞存在免疫排斥等问题。 （2）干细胞潜在的理想种子细胞，诱导分化技术有待完善。 （3）多种类型细胞协调增殖、分化。 以骨为例 1-细胞 成骨细胞：合成ECMs、矿物质、 胶原，组装成新骨 破骨细胞：分泌酶使ECMs、矿物 质、胶原被吸收 软骨细胞：合成ECMs构成软骨 干细胞 2-支架 羟基磷灰石[Ca5(PO4)3OH，HA]、 胶原纤维 3-生长因子 骨形态发生蛋白 （二）支架材料 1.定义 组织工程支架材料是 指替代细胞外基质使 用的生物医学材料材 料。 纤维支架材料 细胞外基质 (extracellular matrixc, ECM ) （1）定义：动物细胞合成并分泌到胞外、分布在细 胞表面或细胞之间的大分子。 （2）分布：结缔组织中ECM含量较高。 （3）组成：构成细胞外基质的大分子包括：胶原、 非胶原糖蛋白、弹性蛋白、氨基聚糖与蛋白聚糖四大 类。 （4）功能： 1）ECMs提供细胞所需的力学和化学信息，是细胞发 挥功能的环境；对细胞群体有支持、保护的作用。 2）ECMs对细胞形态、迁移、增殖、分化有调节作用 。 2.特点 （1）生物相容性：生物医学材料引起宿主反应 和产生有效作用的能力。 （2）生物降解性：材料完成支架的作用后能被 降解，降解速率与细胞生长速率相互协调。 （3）合适的三维立体结构。 （4）加工性与一定的机械强度。 （5）良好的消毒性能。 3.分类 有机材料与无机材料、天然材料和人工合成材料 、单一材料和复合材料。 （1）有机材料 1）天然高分子材料 胶原、壳聚糖、透明质酸等。 A蛋白类 胶原（Collagen） 胶原是细胞外最重要的水不溶性纤维蛋白, 是 构成细胞外基质的骨架，是胞外基质重要的 结构蛋白。 根据组成的氨基酸与聚合度不同有10种。具 有高度缠绕的螺旋结构的纤丝，由纤丝与其 他基质分子相互作用达到组织需要的强度、 弹性。 成纤维细胞、成骨细胞、软骨细胞、上皮细 胞等合成或分泌，分布于各个部位。 B多糖类 壳聚糖（Chitosan） 甲壳质的基本单位是乙酰葡萄糖胺，它是由1000～3000 个乙酰葡萄糖胺残基通过p1，4糖甙链相互连接而成聚合 物，是节肢动物角质内的主要结构多糖。 壳聚糖是甲壳质的部分脱乙酰化产物，具有阳离子性 质，因此可以吸引糖胺聚糖、蛋白聚糖等带负电荷的大 分子聚集在支架内，即利于收集组织液中的生长因子。 透明质酸（Hyaluronic acid,HA） 透明质酸是由N-已酰氨基 葡萄糖及D-葡萄糖醛酸的 重复