北方某地区牛布鲁菌病流行病学调查及布鲁菌多重PCR检测方法建立.doc

摘  要  为了解北方某地区牛群中布鲁菌病的疫情，采取更为有效的防控措施，本文利用 虎红平板凝集试验（RBT）、试管凝集试验（SAT）和间接酶联免疫吸附试验（I-ELISA） 随机对该地区牧场及散养牛群进行了布鲁菌病流行病学调查，同时对以上三种方法的 检测水平进行了比较；根据 GenBank 已发表的布鲁菌基因序列计合成三对特异性引 物，建立了同时检测布鲁菌属及牛、羊种布鲁菌的诊断鉴别性多重 PCR 方法，并对 其进行了初步应用。 用上述三种方法随机对北方某地区牧场和散养牛的 950 份血清进行布鲁菌病血 清抗体检测，表明该地区布鲁菌病流行情况较为严重，但不同群体阳性率差异较大， 牧场阳性率最高达 50%，最低阳性率仅为 4.6%，种牛场未检出阳性血清，散养奶牛 阳性率为 39.3%；RBT 检出阳性血清 105 份，阳性率为 15.8%，SAT 检出阳性血清 128 份，阳性率为 19.2%，I-ELISA 检出阳性血清 262 份，阳性率为 27.6%，结果表 明 I-ELISA 阳性率最高，SAT 次之，RBT 最低。 所建立多重 PCR 方法的敏感性可达 100pg 左右，且具有很好的特异性与重复性， 对 7 株参考株葡萄球菌 26001 等的 PCR 扩增均为阴性，初步临床样品应用表明该方 法可用于乳样、阴道及粪便棉拭的检测。 关键词：布鲁菌病；流行病学调查；多重