一株海洋中性蛋白酶高产菌S-3685的鉴定及产酶条件.pdfVIP

第36 卷 第 5 期 渔 业 科 学 进 展 Vol.36, No.5 2 0 1 5 年 1 0 月 PROGRESS IN FISHERY SCIENCES Oct., 2015 DOI: 10.11758/yykxjz / 一株海洋中性蛋白酶高产菌S-3685 的 鉴定及产酶条件* 1,2 1 1 1 1① 马子宾 郑鸿飞 刘均忠 郝建华 孙 谧 (1. 农业部海洋渔业可持续发展重点实验室 中国水产科学研究院黄海水产研究所 青岛 266071 ； 2. 上海海洋大学食品学院 上海 201306) 摘要 通过生理生化、分子生物学、单因子优化等方法研究了来自南海海域一株产中性蛋白酶菌 株S-3685 ，并对其在250 ml 摇瓶中的培养条件进行了优化。结果显示，该菌株初步确定为芽孢杆 菌属(Bacillus) ，发酵培养的最佳碳、氮源分别为葡萄糖10 g/L 和豆面10 g/L，牛肉膏5 g/L ，酵母 膏5 g/L。无机盐MgSO ·7H O、Na CO 、KH PO 最佳浓度分别为0.2 g/L、2.0 g/L 、1.0 g/L；菌株 4 2 2 3 2 4 在培养基起始pH=7.0 、4%接种量、15 ml/250 ml (v/v)装液量和30℃的条件下，发酵72 h 获得较高 的酶产量。在最佳培养条件下产酶量为4250 U/ml ，是优化前的5 倍。 关键词 海洋微生物；中性蛋白酶；芽孢杆菌属；鉴定；培养条件优化 中图分类号 Q939.9 文献标识码 A 文章编号 2095-9869(2015)05-0131-07 海洋以其独特的低温、高压、高盐环境造就了海 过优化该菌产酶的条件以提高其单位酶产量，为工业 洋生物的多样性与独特性( 肖峰等, 2011)。从海洋微生 生产创造条件，并为进一步的研究与应用打下良好的 物中筛选所需的生物活性物质是近些年研究的热点。 理论基础。 而海洋微生物酶的研究已经成为发达国家开发新型 1 材料与方法 酶制剂的重要途径(孙谧等, 2000) 。 中国水产科学研究院黄海水产研究所海洋产物 1.1 菌株及培养基 资源与酶工程研究室从南海海水中筛选得到了产中 菌株由中国水产科学研究院黄海水产研究所海 性蛋白酶的芽孢杆菌Bacillus sp. S-3685。芽孢杆菌 洋资源与酶工程室分离保藏。 生长快、长势旺，是重要的工业微生物菌种，几乎 活化培养基：葡萄糖 1%，蛋白胨 1%，牛肉膏 35%的蛋白酶都是由芽孢杆菌生产的(Kalisz, 1988) 。 0.3% ，NaCl 0.5% ，pH 为7.0 ； 蛋白酶是一类非常重要工业用酶，它在洗涤剂、饲料、 基础发酵培养基：配方与活化培养基相同。固体 制革脱毛、生丝脱胶、有机合成、酒类澄清、明胶及 培养基添加2%琼脂粉。 蛋白胨产生、肉质嫩化和医药治疗等方面广为应用 (Rao et al, 1998) ，约占酶制剂市场的60%(Nascimento 1.2 菌株的鉴定 e