维生素D对TDI刺激诱导的人支气管上皮细胞表达血管内皮生长因子及其通透性的影响.pdf

硕士研究生：周晓婷 指导老师：蔡绍曦教授 摘要 支气管哮喘(简称哮喘)是一种严重影响人类健康的慢性呼吸道疾病。研 究显示，全球哮喘病人约3亿，我国哮喘患者数量庞大，且有不断增加的趋势。 哮喘这一基因与环境因素共同导致的复杂疾病，即使在今天生物．环境．心理的疾 病评估模式中，其发病、发展等环节仍不清楚，故此，目前对哮喘患者的治疗 以症状控制为主。多项临床研究都表明，尽管大部分诊断明确的患者在规范化 治疗后症状能够得到有效控制，却无法逆转或阻止哮喘的自然病史，最终产生 不可逆的气道结构性改变。可以看到，哮喘的发病机制不明，使得哮喘的预防 和根治成为了不可能的任务。因此探讨哮喘发病机制、寻找新的治疗乃至预防 靶点仍然是呼吸专业关注的重大课题。 随着研究的不断拓展和深入，关于哮喘发病的假说不断增多，其中气道局 部环境结构、功能受损，免疫作用异常成为研究热点，气道在哮喘发病中的地 位被大大提升。支气管上皮细胞(HBE)，作为气道抵抗外来侵害的第一道防线， 其物理屏障作用非常明显，气道上皮通透性增高是致喘物质接触上皮下免疫细 胞的第一环。同时HBE在气道固有免疫中也发挥着重要的作用。近年来也证实， HBE是哮喘固有免疫与获得性免疫联系的桥梁，在多种触发因素作用下，HBE 释放多种炎性介质如近年来证实与哮喘炎症相关的TSLP，VEGF，与免疫、炎 性细胞发生广泛的联系，还能够通过上皮问充质转化成为气道结构细胞参与气 道重建过程，可见HBE从各个环节参与了哮喘的发生、发展。 哮喘中多种细胞因子表达、释放存在异常，这些因子参与了气道免疫失衡 摘要 的发生、发展，维持着哮喘气道炎症，促使气道改建。因此，探讨引发炎症 衡的关键细胞因子会给哮喘的防治带来新的曙光。有研究通过转基因动物实 表明，阻断血管内皮生长因子(VEGF)，能使哮喘的气道炎症、气道重塑、 道高反应性等病理生理变化趋于正常化。本课题组前期研究已经证实VEGF 职业哮喘诱发因素甲苯二异氰酸盐(TDI)，屋尘螨以及过氧化氢等能够导致HBE 通透性增高的过程中发挥重要作用。上述均提示VEGF在哮喘的发病中占有一 席之地，VEGF可能成为哮喘防治的重要靶点。 界将其归为激素一种，而不仅仅是维生素。它的生物学效应是由一种核受体超 D 家族成员一维生素D受体(Vitamin reeeptor，VDR)介导，同时还有一部分效 应是通过与胞膜的VDR结合，经由非基因组信号转导实现的。l，25一二羟维生素 D。除了调节钙和骨代谢，还发挥重要的免疫调节作用。APC和T细胞是它在免 疫系统中发挥作用的主要靶细胞。1，25羟维生素D。及其类似物可直接作用于 T细胞，或通过调节APC的功能问接影响T细胞的功能。l，25．二羟维生素D。 及其类似物如：25羟基维生素D。，都对APC和T细胞的作用乜71，这种作用有赖 于这两种细胞内VDR的表达，以及它们信号转导通路中的共同靶分子。已有 。而 一些人群健康问题，例如：普遍的人群维生素D低水平状况是否与一些疾病发 生相关被研究者们关注。关于维生素D与过敏性疾病的研究层出不穷。在VDR敲 除小鼠中诱发哮喘模型中发现，虽然]gE浓度增高和Th2型细胞因子增加，但 这种小鼠并没有发生气道炎症、嗜酸粒细胞浸润或气道高反应性等哮喘样症状。 上述研究证据说明了维生素D在哮喘发病中的地位。但维生素D调节哮喘的具 体环节尚鲜见报道，本研究是在前期证明TDI促进气道上皮通透性部分经由 VEGF途径的基础上，通过建立维生素D作用细胞的模型，试图观察这一过程， 响，在体外探讨维生素D对气道上皮炎症介质的释放及屏障功能的影响及可能 机制。 方法： l、制备甲苯二异氰酸酯．人血清白蛋白复合物(TDI．HSA)。 2、购买分析纯的25羟维生素D3。 3、人支气管上皮细胞系16HBE的传代，培养。 活力的影响。分组情况：(1)25羟维生素D3作用：对照组，2×10-9mol／L25 10-9mol／L 羟维生素D3组