维生素A对奶牛乳腺硒蛋白合成及其抗氧化功能影响机理研究.pdf

本论文由国家自然科学基金项目资助 1160466) (编号：3 摘 要 本论文分5个部分，主要研究了维生素A(VA)对奶午乳腺硒蛋白合成及抗氧 化功能的影响机理。试验l采用完全随机试验设计，按照体重、泌乳量及胎次相近的 原则，将28头奶牛分为2组，每组14头。两组试验日粮分别在基础日粮中按照110 和220 BW BW的高剂量的VA对奶 IU／kg VA的标准来添加，以探讨添加220IU／kg 牛产奶性能、抗氧化及免疫功能的影响。试验2采用体外法，采用完全随机试验设计， 研究了不同浓度的VA(0，0．05，0．1，O．2，l和2I．tg／mL)对奶牛乳腺上皮细胞(BMEC) 硒蛋白合成及抗氧化功能的影响，·筛选出了发挥较好抗氧化功能的VA作用剂量，并 从硒蛋白合成、基因转录和蛋白质水平探讨了其可能的影响机理。试验3利用过氧化 氢(H202)作为刺激源，以细胞存活率及抗氧化指标为判断指标，研究建立了BMEC 的氧化损伤模型。在试验3的基础之上，试验4分为对照组、HzOz损伤组、VA组和 理。 本试验研究初步得出以下结果： 10 BW (1)与添加l VA相比，日粮中添加高于NRC推荐剂量(220 IU／kg IU／kg BW)的VA，x,l奶牛产奶性能无显著的影响，但对抗氧化功能有显著的促进效果， 活性，降低丙：二醛(MDA)和活性氧(ROS)浓度。 (2)220BW IU／kg VA可以显著的增强奶牛的免疫功能，提高血清中免疫球蛋 白M、免疫球蛋白G、免疫球蛋白A、自介素l、肿瘤坏死因子、VA、可溶性CD4 含量及sCD4tsCD8，降低sCD8含量和乳中体细胞数。 蛋自GPx和TrxR活性及SelP含量的上调作用呈显著的剂量依赖关系，以l ng／mL 的促进作用较强，但添加剂量为2gg／mL时促进效果有减弱的趋势。VA可剂量依赖 GPxl 性的上调硒蛋n mRNA及其蛋白表达量，以1 lig／mI．时较好。VA也可．卜渊TrxRl 和SelP的mRNA表达量及7FrxRl蛋白表达量，以1—2 p．g／mL时较强。综合多项指标， 以1gg／mLVA剂量组的抗氧化效果较好。 (4)600 gmol／LH202作用细胞6 及CAT活性显著一卜降，MDA含量显著提高。说明H202作用浓度为600lamoI／L，作 用时间为6h，对BMEC产生了明显的氧化应激，可作为建立细胞氧化损伤模型的适 宜剂量与作用时间。 制了上述指标的相应变化，保护了BMEC免受氧化应激的损伤。 的产生；VA预处理组阻止了这些指标的相应变化，并提高了TrxR的活性。此外， 氨基末端激酶(州K)的磷酸化水平的升高，有效地调节了ARA的代谢。提示VA 对H202诱导的细胞氧化损伤的保护作用可能与TrxR活性升高引起的ARA浓度降低 有关。 VA后，显著 表达量，提高了cPLA2活性及其基因表达，引起ARA浓度升高；-}lJJn 减缓了这些指标的变化，使得TrxR活性升高，ARA含量减少。 指标的变化。 胞氧化损伤的保护作用与TrxR活性的升高引起的MAPK信号通路的抑制、进而导致 的ARA浓度降低有关。 综合上述研究结果得出，VA可以促进奶牛乳腺的抗氧化功能，其机理是VA可 MAPK信号通路的抑制，进而降低了ARA的浓度，保护了BMEC免受氧化损伤。 关键词： 维生素A：奶牛：乳腺上皮细胞：硒蛋向：抗氧化；花生四烯酸 Effectsand