骨巨细胞瘤中Bax蛋白和Fas抗原表达及意义.pdfVIP

中 文 摘 要 前 言 Bcl一2基因是最早被发现的主要的凋亡基因，Bax基因是Bel -2相关基因，其编码的Bax蛋白与Bcl一2蛋白有21%的同源 性，分子量为21KD。由192个氨基酸组成，Bax蛋白有对抗Bcl一 2蛋白抑制凋亡的作用。研究发现Bax/BcI-2的比值对于决定细 胞接受刺激后存活与否有关键性作用。Bcl一2过量表达，细胞存 活;Bax过量表达，细胞死亡。因此认为Bax基因是极为重要的促 细胞凋亡基因之一。Fas抗原是一种细胞膜抗原，其主要功能是 介导细胞凋亡。具有抵挡Be卜2蛋白抑制细胞凋亡的作用。Fas 抗原和Bcl-2蛋白在NHL中的表达研究发现Fas抗原介导和促 进细胞凋亡，与Bcl-2蛋白作用相反，其在细胞中的表达量呈负 相关。另外，体外研究发现Bcl一2与Bax的比值升高，可使肿瘤 细胞对目前所有的化疗药和放疗耐受。Bax在放化疗使肿瘤细胞 发生凋亡而死亡的过程中起重要作用。同时，大量研究表明，Fas 系统在抗癌药物介导细胞凋亡中发挥作用。近些年来，在对癌基 因的研究中，凋亡基因受到了广泛的重视。骨巨细胞瘤是骨科临 床常见的原发肿瘤之一，来源尚不清楚，我国发病率较高，据统计 仅次于骨软骨瘤，居第二位。目前对其发生、发展机理尚不十分清 楚，对其临床治疗尚不能达到满意的效果。本实验以免疫组化的 方法检测骨巨细胞瘤的Bax蛋白及Fas抗原的表达，讨论Bax蛋 白及Fas抗原的表达与骨巨细胞瘤的关系。 实 验 材 料 (一)标本:中国医科大学第一临床学院病理室1995年10月 至2000年4月的骨巨细胞瘤石蜡标本56例。经三位病理专家复 查HE染色切片再次确认，确诊并取得一致结果的共42例，其中 按照Jaffe分级I级18例，II级15例，m级9例。 (二)诊断标准:病人有患处疼痛史，X线表现为侵及骨脂的 溶骨性病灶而无反应性新骨形成，病变部骨皮质膨胀变薄，呈肥皂 泡样改变。镜下可见多核巨细胞均匀散布于大量圆形，椭圆形或 肥硕的短梭形单核基质细胞中，两者的胞核相象。肿瘤富有血管， 常伴有出血。多核巨细胞的核数从数个到数十个不等。 (三)Jaffe分级标准:多核巨细胞数量甚多，基质细胞分化良 好者属于I级;多核巨细胞数量很少，基质细胞分化较差，有丝分 裂像多者属于1级;介于两者之间者为五级。 (四)试剂:鼠抗人Bax单克隆抗体(即用型)，鼠抗人Fas单 克隆抗体(即用型)和二步法免疫组化试剂以及DAB均购自美国 抗体诊断有限公司。 实 验 方 法 (一)二步法免疫组化染色:5p=石蜡切片常规脱蜡、水化，再 经0.01M,PH=6.0的构椒酸缓冲液微波修复20分钟并室温冷却 20分钟，再用3%过氧化氢溶液固定5分钟，依次加人A液(一抗 鼠抗人Bax单克隆抗体，室温,60分钟).B液(抗小鼠抗体同辣根 过氧化物醉的化合物，室温,30分钟)。个步间均以PBS(PH值= 7.4)缓冲液浸洗3次，每次2分钟。DAB显色，苏木素复染，常规 脱水，透明，封片。Fas抗原染色除A液(一抗 鼠抗人Fas单克隆 ·2 · 抗体)外，其它步骤与Bax蛋白染色过程相同。 (二)对照:用已判定阳性的切片作阳性对照;以0.Olmol/L PBS液(PH二7.4)替代一抗作为每次染色的阴性对照;实验组进 行三个病理级别之间的组间对照。 (三)结果判定:以OLYMPUS生物显微镜观察染色切片。Bax 与Fas都以细胞浆(或膜)呈棕黄色至深棕黄色颗粒为阳性细胞。 切片中阳性细胞数)10%为阳性病例，阳性细胞数10%为阴性 病例。Fas抗原染色的结果判定采用同样的标准。 (四)数据统计:以卡方检验确定不同病理分级的骨巨细胞瘤 Bax蛋白表达及Fas抗原表达之间有无差异。 实 验 结 果 (一)Bax蛋白:42例骨巨细胞瘤中，共有21例Bax蛋白染色 阳性，21例阴性，阳性率50%.I级骨巨细胞瘤Bax蛋白阳性率 为66.7%，II级为46.47%，m级为22.22%。经卡方检验I级与 IIm级之间有显著