流产布氏杆菌S19株bp26基因标记疫苗株构建及免疫原性初步的研究.pdf

摘 要 摘 要 布氏杆菌病是一种在世界范围内广泛流行并造成严重危害的人畜共患病，布氏杆 菌是布氏杆菌病的病原体，它是一种胞内寄生的革兰氏阴性球杆菌，无芽抱，有荚膜， 无鞭毛不能运动，不呈两极染色。布氏杆菌病的特点是，一旦发病并转入慢性就无法 根治，因此，布氏杆菌病的预防对于控制布氏杆菌病是非常重要的，预防主要通过接 种疫苗实现的。 我国目前使用比较广泛的减毒活疫苗株有牛流产布氏杆菌 S19 弱毒疫苗，马耳他 布氏杆菌M5 弱毒疫苗，以及猪布鲁氏菌S2 弱毒疫苗等。在这些疫苗株的使用中还发 现，它们具有交叉免疫保护效果，但是，也发现了一个比较严重的缺点，即减毒活疫 苗在抗原上与强毒菌株没有大的区别，而布氏杆菌病监测和检疫中主要采取基于 S-LPS 抗原“O ”链特异性抗体而建立的免疫学方法，因此，无法区分是自然感染还 是人工免疫，这就很难得出正确的监测和检疫的结果，给检测和检疫带来很大的困难。 如何解决现有疫苗的这以主要问题，对于布氏杆菌病的防控具有重要的意义。 BP26 蛋白是布氏杆菌的一个非常重要的诊断抗原，已有很多用此抗原来进行布氏 杆菌诊断的报道。BP26 蛋白作为布氏杆菌的一个周质蛋白，对布氏杆菌的毒力不起决 定性的作用，但确是布氏杆菌的一个优势抗原，能够诱导高滴度的抗体。BP26 蛋白的 这些特性，为我们进行研究基因标记疫苗研究提供了很好的靶标。如果对该抗原进行 缺失标记，将为鉴别诊断方法的建立提供标识序列。 因此，本项目拟利用同源重组的方法，对牛流产布氏杆菌S19 弱毒疫苗进行改造， 构建成 bp26 基因缺失的标记疫苗株，命名为 S19-△26 。小鼠感染模型表明，标记疫 苗株S19-△26 与亲本株S19 具有同样的安全性，残留毒力没有因BP26 蛋白的缺失而 发生改变，同时S19-△26 免疫的小鼠一直没有出现BP26 特异性抗体，为鉴别诊断提 供可行性。在小鼠免疫保护试验中，S19-△26 和 S19 接种的小鼠具有同样抵抗 S544 强毒菌株攻击的能力。S19-△26 具备从血清学角度区分 S19-△26 免疫与野生型布氏 杆菌感染，对布氏杆菌病防制、监测及净化具有重要的意义。 关键词 S19- △26 ；S19 ；bp26 基因；小鼠模型 I Abstract Construction Of BP26 Gene Marker Strain Brucella Abortus S19 Evaluation Of The Immunogenicity In Mice Abstract Brucellosis, which is caused by Brucella, is one of the most important bacterial zoonosis endemic in many countries. Brucella spp.is the pathogen of brucellosis. Brucella are facultative intracellular, gram-negative coccobacilli without spore, flagella and capsule. One important characteristics of Brucellosis is that once infected, it is hard to cure completely. Therefore, prevention is the most important means to control it. Vaccination is most efficient means for brucella prevention. The vaccines widely used in our courty a