产二羟基丙酮的海洋菌筛选和发酵条件的优化.pdf

摘要 二羟基丙酮是一种重要的化工原料，广泛参与各种聚合、缩合反应，工业 上应用于食品、制药、化妆品等领域。近年来由于生物柴油的产业过热造成废 甘油的大量剩余，使二羟基丙酮(DHA)成为研究热点。本文从厦门海域红树 林土壤中分离筛选得到20株可将甘油转化为DHA的菌株，其中cb20．B1转化 rRNA基因分析表明，菌株为 率较高。对该菌株进行生理生化鉴定实验和16S 黄杆菌属(Flavobacterium)的嗜盐黄杆菌(Flavobacteriumhalmsphilum)。 DHA可以用生长细胞发酵生成，也可以用全细胞静息转化甘油产生。本文 首先确定了生长细胞的发酵时间和初始甘油浓度，然后在摇瓶基础上研究了生长 细胞的发酵条件，优化后在300C下发酵30h后二羟基丙酮产量达到了28．6 g／L。 通过对菌株ch20．B1进行紫外线、氯化锂、硫酸二乙酯复合诱变，获得了1 株遗传稳定的高产DHA菌株ch20．1，通过对ch20．1和出发菌株的性能对比研究， 甘油初始浓度为54．0 h后DHA产量达到了40．2 g／L时，转化30 g／L，DHA对甘 油的得率达到了74．4％，比出发菌株提高了40．6％，体积生产速率由0．83g／(Lh) 提高到1．33 g／(L舢。 对诱变菌株ch20．1进行PB结合响应面发酵条件的优化，PB实验表明：碳 酸钙、山梨醇和酵母膏的浓度是影响DHA产量的三个关键因素。以DHA产量 为响应目标，对三因素进行中心复合设计，并经响应面法优化分析得到影响DHA 产量的非线性模型，确定了发酵的最优培养基组成为：初始甘油浓度54．0g／L， 碳酸钙浓度16．4 g／L，酵母膏浓度为12．7g／L，山梨醇浓度13．19／L。在最优条件 h，DHA产量达到52．0 下发酵30 h)。在90．0g／L经过 g／L，生产强度为1．73趴L 甘油的耐受性实验，DHA的产量从耐受前的40．8 g／L，提高了 g／L提升到了61．0 49．5％。诱变菌株在5L发酵罐中初始甘油浓度为90．0饥，温度为30℃、通气 量为6vvm、搅拌转速为200 h后DHA产量达到 rpm、pH为6．5时，发酵进24 了70．2 h)。 g／L，生产强度为2．93∥(L 在全细胞静息转化甘油方面，用低廉的玉米浆和玉米糖化液代替酵母膏来 制备细胞，优化转化条件后，在初始甘油浓度70．0 h转化，产生了 g／L经过25 60．2 g／L的二羟基丙酮，转化率达到了86．0％，生产强度达到2．40g／(Lh)。 关键词：菌株筛选；二羟基丙酮；微生物转化；优化 Ⅱ Abstract a involved 1，3-Dihydroxyacetone(Daa)isveryimportantcompound，widely in and ofindustrial various condensatio