FHIT基因在二甲肼诱导大鼠大肠癌过程中转录及其表达异常的实验的研究.pdf

—!!呈查竺堡主堡奎 ±兰塑里 中文摘要 FHIT基因在二甲肼诱导大鼠大肠癌过程中 转录及表达异常的实验研究 研究背景 大肠癌是最为常见的消化道恶性肿瘤之一。近三十年来，它的发病率和死亡率 有逐年升高的趋势。大肠癌的发生、发展是由多因素引起、多基因参与并经历了多 阶段的演变过程，是遗传因素与环境因素共同作用的结果。 跨越染色体上最常见的脆弱位点FRA3B，它是迄今为止在肿瘤细胞中最容易发生变异 的基因；已有的研究认为FHIT基因是环境致癌物作用的靶分子。 为了明确FHIT基因在大肠癌发生、发展过程的作用机制，特别是FHIT基因在 化学物致大肠癌中的mRNA转录和蛋白表达的变化规律，本研究选择了二甲肼诱导 测序等方法，对FHIT基因在成癌过程的变化规律进行研究。全文分为三部分： 第一部分二甲肼诱导Wistar大鼠大肠癌动物模型的建立 且的：建立以二甲肼诱导Wistar大鼠大肠癌的动物模型，并观察大肠粘膜隐窝细胞 在成癌过程中的增殖／凋亡变化。方法：常规剂量(20mg／kg体重)皮下注射二甲肼诱 导大鼠大肠癌，分诱癌中期(第10周末)和末期(第25周末)处死动物观察成瘤率； 分别以BrdU标记细胞免疫组化方法和TUNEL法检测大肠粘膜隐窝细胞的增殖／凋亡 期大肠癌成瘤率为87．1％(27／31)；(3)诱癌组大鼠大肠隐窝细胞的增殖／凋亡指数 之比显著高于对照组。结论：成功建立了二甲肼诱导Wistar大鼠大肠癌动物模型， 诱癌率达87．1％，并观察到了正常大肠粘膜到腺瘤，最终到癌的演变过程；大肠粘 膜隐窝细胞的增殖／凋亡指数比值与大肠癌的发生率之间有非常好的相关性，可以有 效地评价大肠癌的发生。 第二部分FHIT基因在D删诱导的大鼠大肠癌中转录异常的实验研究 目的：研究FHIT基因在二甲肼诱导大鼠大肠癌过程中mRNA异常转录变化。方法： 应用巢式RT—PeR技术及DNA直接测序方法，对二甲肼诱导的大鼠大肠癌、大肠腺瘤 复旦大学博士论文 中文摘要 以及正常大肠粘膜组织进行FHIT基因cDNA检测。结果：大肠腺瘤中FHIT基因的异 (22／42)；DNA测序发现FHIT基因的异常转录本是由于核苷酸片段的缺失和插入突变 FHIT基因的异常转录与二甲肼诱导大鼠大肠癌的发生、发展有关；首次发现大鼠FHIT 基因异常转录本中存在插入突变；发现一条新的中国种Wistar大鼠的FHIT基因序 列。 第三部分FHIT基因在D删诱导的大鼠大肠癌中蛋白表达异常的实验研究 目的：研究Fhit蛋白在DMH诱导的大鼠大肠癌中的异常表达变化。方法：应用枸橼 酸一微波一链酶卵白素一过氧化物酶免疫组织化学方法，检测二甲肼诱导的大鼠大肠癌 癌、大肠腺瘤以及正常大肠粘膜组织中Fhit蛋白的表达情况。结果：Fhit蛋白在正 常大肠粘膜组织中均呈强阳性表达，在14．3％(3／21)大肠腺瘤中呈低表达，在47．6 表达或失表达与二甲肼诱导大鼠大肠癌发生、发展存在一定联系；检测Fhit蛋白表 达可以在一定程度上反映大肠癌的发生、发展进程。 ONA测序免疫组织化学 二甲肼 巢式RT—PCR 关键词： FHIT大肠癌 分类号：R735．3 2 墨呈查堂堕主望兰 茎茎塑茎 Abstract onAberrant and of Study Transcription FHITGenein Expression Colorectal CarcinomasInduced in by Rats 1,2-dimethylhydrazine Background