细胞荧光探针的合成和应用.pdf

摘 要 荧光探针作为一类重要的检测物质，广泛应用于分子生物学、细 胞生物学、生物化学、医学、化工等方面。目前，用于标记的荧光探 针染料主要有荧光素类、罗明丹类、香豆素类、邻苯二甲醛类等，其 中荧光素及其衍生物一直是生物及化学分析领域研究的热点。进入细 胞内的荧光素类衍生物因其酶解所得荧光素，在水中荧光量子产率较 高、摩尔消光系数高、无毒、成本低，适合于研究蛋白质结构特性及 细胞检测等方面。 细胞是生物体的生命活动和形态结构的基本单位。将荧光探针标 记活细胞来研究特定细胞内的属性，一直是该领域的前沿研究课题。 但作为活细胞标记探针必须具备： (1)探针能特异性与细胞内特定 底物结合； (2)探针标记产物信号强，可区分未标记细胞；(3)探 针对目标细胞无损伤； (4)背景荧光干扰小，即：荧光产物很少从 细胞内渗漏出。荧光素二乙酸酯、氨基荧光素和异硫氰酸酯荧光素等 曾用于标记活细胞，但荧光产物的渗漏问题未得到很好的解决。 本论文以荧光素为母体，对其结构进行修饰，合成了一系列荧光 化合物。合成的具有代表性的荧光化合物旨在改善其亲脂性和特异选 择性，同时减少进入细胞后水解荧光素的反渗透，应用到细胞活性的 检测，优化分析条件。主要内容如下几个方面： 1．综述了荧光素类探针的研究进展及其在细胞学领域的应用。 2．合成了荧光素和二氢荧光素，优化了二氢荧光素的合成工艺， 再对其酯化。通过单一因素法对荧光素二乙酸酯(FDA)和二氢荧光 素-K,酸酯(H2FDA)的稳定性进行实验，探索了其稳定存在的最佳 条件：pH为6—7、温度为0℃、溶剂为丙酮、浓度为5×10。4g／L。 3．合成了硝基荧光素、氨基荧光素、溴甲基乙酸酯中间体，并对 氨基荧光素进行修饰改善其疏水性得到5种氨基荧光素衍生物：5一乙 酰胺基荧光素二乙酸酯(AF—DA)、5．琥珀酰胺基荧光素(SAF)、 5．丁二酰亚胺基荧光素(SF)、5一琥珀酰胺基荧光素二乙酸酯 征其结构。 4．将合成的新型荧光素衍生物分别对HepG2细胞和U266细胞进 行染色，探索了其对细胞染色的最佳条件：浓度为1mg／L，标记时间 为5 三种新型氨基荧光素衍生物的染色效果最好。 关键词：荧光素，荧光探针，细胞，合成，荧光性能 Abstract Asan technical havebeen important mean，fluorescent probes usedinmolecular widely biology，cell andmedicine．At engineering usedtobe present，Fluorescent probes markedhavefluorescein derivatives，rhodamine derivativesandSO on．Fluoresceinandits derivatives，o-phthalaldehyde derivativeshavebeenahot ofresearchinthefieldof spot chemicaland derivativesenteredintothecell biologicalanalysis．Fluorescein were to