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新型生物可降解基因传递系统的研究 摘要 基因治疗即是指将外源基因导入目的细胞并有效表达，从而达到治 疗疾病目的的一种新型治疗手段。由于病毒载体的安全性隐患，用化学 方法构建非病毒基因输送体系成为理想的选择。其主要优势有：无免疫 原性、不受输送基因分子量大小的限制和易于分子构建以获得合适的功 能，然而相对较低的转染效率和由载体所带正电荷导致的化学毒性限制 了非病毒载体的进一步应用。本论文旨在构建一种新型的具备氨酯结构 的可降解基因传递系统，以达到高效低毒的目的，同时能对今后的非病 毒载体构建和应用起到借鉴作用。 本论文的第一部分以丁二醇二氯甲酸酯和低分子量PEI(PEI800Da) 为反应物，分别以3：2和1：1的比例反应得到具有氨酯结构的新型聚乙烯 不同分子量的PEI为标准样，测定了PEIC3：2和PEIC1：1的平均分子量 分子量测定结果间接证明其最终能够降解为初始状态的反应物(PEI 3：2和PEIC 800Da)。考察了PEIC1：1对质粒DNA的复合能力。表明在 两种衍生物／DNA在重量比达到1以上时，均可以形成稳定的粒径在100 nlTl以下的复合物，表面均荷正电，PEIC3：2形成的复合物Zeta电势稳 mV之间，PEIC 定在20～24 之间。考察了PEIC／DNA复合物对COS．7细胞的转染效率，PEIC3：2和 PEIC 25KDa 1：1与Luciferase质粒的重量比在最优的比例下，均有比PEI 高出1~2个数量级的表达效率，以PEIC3：2在载体／质粒的重量比为40 时，转染效率最高。在PEIC的最佳转染条件下，证明了PEIC可成功输 送VZV BAC病毒质粒，不受输送质粒分子量大小的限制。考察了载体 的细胞毒性，PEIC3：2在浓度增大到50 I-tg／mL时，对细胞仍然没有表现 出细胞毒性，同PEI800Da类似；PEIC 1：1在浓度大于10肛g／mL时对细 胞生长状况有一定影响，但仍显著高于对应浓度时的PEI25KDa。对PEIC 的体内转染情况作了初步考察，复合物静脉注射和肌肉注射后，PEIC组 的表达量均高于PEI25KDa组，静脉注射后在肺组织中的表达量最高。 本论文第二部分以乙二醇二氯甲酸酯和丁二醇二氯甲酸酯分别与人 体自身的小分子多胺物质一精胺按照1：1的比例进行反应，得到具有氨 的重量比(w／w)达到2以上时，均可以形成稳定的复合物颗粒，平均 rlnl 粒径在200nlTI以下，随着比例的增加，平均粒径减小并稳定在100 以内，表面荷正电，Zeta电势稳定在25-31mV之间。考察了Et．SP和 在重量比为7时表达量最大，且高于PEI IrLg／mL以上时，开始对细胞的生长状况产生不同程度的影响，但仍优于 对照组。 本文研究结果表明，具有氨酯结构的新型可降解基因输送载体，体 外具有高转染效率和低细胞毒性的特点，并具有进一步结构修饰和优化 的可能，为最终的临床研究提供了新的方法和思路。 关键词：基因输送，非病毒载体，聚阳离子，聚乙烯亚胺，精胺，转染 与细胞毒性 BIoDEGRADABLEGENE STUDIESoFNoVEL DELIVERYSYSTEMS ABSTRACT Gene isanovel forthetreatmentofdisease therapy approach by to the issuesof