线粒体异柠檬酸脱氢酶和α酮戊二酸脱氢酶系活性和创伤性脑损伤的实验的研究.pdf

上海交通大学医学院2004级博士论文 摘要 线粒体异柠檬酸脱氢酶和Cl一酮戊二酸脱氢酶系活性与 创伤性脑损伤的实验研究 摘 要 brain 创伤性颅脑损伤(Traumatic injury，TBI)越来越成为 威胁人类健康的首要问题。创伤性脑损伤居儿童和成人意外死残原 因之首。目前TBI伤情有不断加重的趋势，伤情亦趋复杂化。颅脑 损伤后局部及全脑血流代谢不匹配已被实验及临床资料证实。线粒 体作为创伤后病理反应的中心成为新近研究的焦点以及治疗的靶 点。异柠檬酸脱氢酶(Isocitrate 戊二酸脱氢酶系(alpha-ketoglutaratedehydrogenasecomplex， KGDHC)是存在于脑组织中的线粒体酶。对于三羧酸循环的进行，能 量代谢的稳定，神经递质的代谢等诸多生理及病理过程极为重要。 酶活性的降低与诸多神经系统退行性疾病有关。亚低温脑保护技术 已经被应用于创伤性脑损伤治疗策略之一。但是由于创伤性脑损伤 病理机制的复杂性以及低温机制尚未完全阐明使得创伤性脑损伤 的治疗手段繁多但缺乏规范性。本研究着眼于创伤后导致继发性损 伤的关键病理反应一能量代谢异常，着重研究参与三羧酸循环的关 键线粒体酶-ICDH及KGDHC在伤后的活性变化，以及动物创伤性脑 损伤对酶活性调节的反应，同时研究了亚低温对创伤性脑损伤后酶 活性的影响，及其与损伤病理机制的关系。期望研究代谢关键酶与 上海交通大学医学院2004级博士论文 摘要 创伤性脑损伤病理机制的关系能够成为创伤性脑损伤治疗的新方 向。 第一部分线粒体酶(ICDH及0【一KGDHc)在大鼠创伤性脑损伤后 不同脑区活性变化的实验研究 目的：在大鼠液压脑损伤动物模型中，研究线粒体ICDH及 0【一KGDHC活性在损伤后不同时间点，不同脑区以及不同损伤程度中的 变化。同时研究了不同损伤对大鼠神经功能的变化。 方法：成年健康SD大鼠随机分为四组：假手术组，轻度损伤组， 中度损伤组，重度损伤组。每组又根据时间点不同分为伤后6h，24h， 对侧皮层，海马区以及丘脑ICDH及KGDHC活性。应用平衡木行走实 验以及Morris水迷宫对实验对象的平衡运动功能以及认知功能进行 评价。实验过程中对大鼠的生理指标也同时进行了检测分析以保证模 型的准确可靠。 结果：成功建立大鼠不同损伤程度的侧向液压脑损伤模型。中度 及重度创伤性脑损伤后后大鼠平衡行走实验中步行逃脱时间伤后6h 迷宫检测表明伤后24小时中度及重度损伤造成实验对象登台时间以 及登台累计路径显著延长(P0．05)。直至伤后7天仍未恢复至对照 脑区均显著降低(PO．05)。而在轻度损伤对侧脑区及轻度损伤的损 伤侧脑区，这种变化于伤后72小时完全恢复(P0．05)。中度及重度 H 上海交通大学医学院2004级博士论文 损伤酶活性显著降低一直持续至伤后7天。 结论：大鼠侧向液压脑损伤造成了动物伤后生理指标的显著改 变。大鼠神经功能严重受损。伤后6h参与三羧酸循环的线粒体关键 酶活性显著降低，全脑代谢显著全面抑制。伤后对侧脑ICDH及 0c—KGDHC活性在72h恢复正常。而中度及重度损伤侧酶活性直至伤后 7天仍未恢复。结合伤后神经功能的障碍， ICDH以及KGDHC酶活性 降低参与了大鼠的损伤后病理反应。 第二部分抑制a-KGDHC酶活性对大鼠创伤性脑损伤的影响的实 验研究 目的：研究抑制a-KGDHC活性对大鼠液压脑损伤的影响。探讨 KGDHC活性变化在创伤性脑损伤发生发展中的作用。 方法：实验动物随机分为3组：假手术组，溶剂对照组(中度脑 损伤)，KMV注射组(中度脑损伤)。于损伤前24h立体定向侧脑室 天损伤侧皮层及海马丘脑神经组织病理学变化，伤后24小时及72小 时，7天中度液压脑损伤神经功能改变。同时检测损伤侧皮层及海马 丘