紫海胆壳中化学成分的分离鉴定及活性的研究.pdfVIP

Thesis for the Degree of Master Isolation, identification and biological activity of chemical substances extracted from Anthocidaris crassispina shell Supervisor: Prof. LI Wei Master Candidate: Zhu Chunpeng College of Food Science and Engineering DALIAN OCEAN UNIVERSITY JUNE 2014 本研究由国家海洋局公益行业科研专项 （项目编号201205022-7 ）和辽宁省教育厅 科研项目 （L2012256 ）资助 摘要 摘要 海胆含有多种的生物活性物质，具有广泛的药用价值和保健作用。近代中医药认为 “海胆味咸，性平。有软坚化痰，散结消肿，治酸止痛，清热解毒的功用。海胆壳中同 样含有多种的生物活性物质，但海胆壳多被作为废弃物丢弃，不仅浪费了潜在的药用资 源，也对环境造成压力。 本研究主要以海胆壳为原料进行了紫海胆壳与马粪海胆壳浸膏提取工艺的研究、紫 海胆壳化学成分的分离纯化、单结构鉴定和生物活性的研究。 采用超声辅助法、热浸提法和闪式冷提法制备浸膏工艺进行研究，用75%乙醇提取， 浓缩得到浸膏，发现用超声辅助法提取浸膏的提取率和甾体类活性成分含量最高，热浸 提法次之，并且马粪海胆壳浸膏的提取率和甾体类活性成分含量高于紫海胆壳浸膏。 紫海胆壳浸膏用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取得到三部分提取物：PEE 、ETA 和 BUA 。采用多种分离手段，例如薄层层析、反复硅胶柱层析、制备薄层色谱层析（pTLC ） 以及重结晶等技术，分别对石油醚层（PEE ）和正丁醇层（BUA ）提取物进行分离纯化， 石油醚层（PEE ）分离得到化合物ACB ，根据理化性质、波谱分析和文献对照的方法对 其进行结构鉴定，鉴定为已知化合物棕榈酸，它是首次从紫海胆壳中分离出的化合物。 正丁醇层（BUA ）分离纯化得到3 种化合物ACA 、ACT 和ACS ，ACA 经结构鉴定为已 知化合物（3 β）-胆甾-5-烯-3-醇；ACT 结构鉴定主产物分子式为C16H32O2，次产物可 能为含有双键的物质，化合物ACS 被鉴定为单棕榈酸甘油酯，这些化合物也是首次从紫 海胆壳中得到的。 对紫海胆壳提取的化合物的抑菌活性和抗肿瘤活性进行了研究，结果表明，紫海胆 壳提取物具有很好的抑菌活性，紫海胆壳浸膏对金黄色葡萄球菌有抑制作用。紫海胆壳 PEE 层提取物对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌有抑制活性；ETA 、BUA 层提取物对枯 草芽孢杆菌、产气杆菌，金黄色葡萄球菌以及大肠杆菌均有不同程度的抑制作用，并且 对金黄色葡萄球菌的抑制效果最为显著。ACB 、ACA 、ACT 和ACS 均对金黄色葡萄球 菌有不同程度的抑制作用。体外抗肿瘤实验表明，化合物ACS 没有抑制肿瘤细胞的活性。 化合物ACT 对人慢性粒细胞白血病急变细胞K562 、人急性髓性细胞白血病细胞HL60 、 人乳腺癌细胞SKBR-3、人乳腺癌细胞MCF-7、人结肠癌细胞SW620 均有显著的抑制作 用。随着化合物ACT 浓度的逐渐升高，各细胞凋亡率均逐渐增高，当ACT 浓度达到150 μg/ml 时，细胞凋亡率最高。化合物ACT 对肿瘤细胞抑制作用以及诱导细胞凋亡的机 理尚不清楚，有待进行进一步研究。 关键词：紫海胆壳；分离纯化；结构鉴定；抑菌活性；抗肿瘤活性 I 紫海胆壳中化学成分的分离鉴定及其活性研究 Abstract Sea urchin shell is the application site, and it