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摘要 固定化细胞生物合成胞苷三磷酸 摘要 本论文通过以胞苷一磷酸(CMP)为底物，啤酒酵母细胞、酵母游 离酶系作为酶原催化合成胞苷三磷酸(CTP)工艺条件进行了研究，并 在此基础上进一步开展了固定化酵母细胞生物合成CTP的研究，考察 了载体种类、CMP浓度、初始葡萄糖浓度、磷酸盐浓度、pH、温度、反 应时间等因素的影响，初步摸索出一条比较优化的固定化生产工艺。 分别对利用啤酒酵母细胞、酵母游离酶系合成CTP的主要影响因 素进行正交实验，得到的最佳工艺条件基本上是一致的。包括CMP浓 度60．0 mmol／L，初始葡萄糖浓度150．0mmol／L，磷酸盐浓度250．0 mmol／g，氯化镁8．0mmol／L，ATP浓度3．0mmol／L，温度35℃。不同 之处在于pH值及反应时间，酵母细胞作为酶原的最佳pH为6．0，反 应时间为2．0 h。 h：酵母游离酶系作为酶原则pH为8．0，反应时间为2．5 前者的转化率为80％以上，后者则达90％以上。-， 通过对固定化载体的选择及几种固定化方式的性能比较，认为k一 卡拉胶是比较好的载体，并通过正交优化得到最佳固定化配比，即卡 拉胶浓度2．7％、细胞量25％、钾离子加入量0-3％、冷凝剂(KCl) h。 浓度2．0％、冷凝时间4．0 通过对固定化啤酒酵母及固定化新鲜酵母细胞通透性的研究，结 果表明：在冷冻三天以上，反复冻融三次及添加适量的表面活性剂情 况下，表观活力得到了大幅度的提高。 对固定化酵母细胞分批转化CTP的影响因素进行正交优化实验， 采用HPLC法分析反应过程中各工艺参数对转化率的影响。在最优化 条件下，转化率达45．7％。 在批次反应的基础上建立柱式连续反应系统，当稀释率为1．89× 104l／s时具有最佳转化率，与分批转化相比较有所提高，最高达57．6‰ 固定化酵母可连续反应4～5批次。 关键词：胞苷三磷酸，啤酒酵母，固定化 英文摘要 BIOSYNTHESISOFCYTIDINE BYIMMOBILIZED YEASTCELLS ABSTRACT is convened Cytidine to monophosphate(CMP) Cytidine dissociative beer and triphosphate(CTP)by yeastscompoundenzymes from that has been yeasts studiedinthis basedonthese paper．And studies， ofCTP immoblizied cells biosythesisby yeast wouldbecarried out， onseveralkindsof meanwhile，effects