扫描探针显微镜进行细胞扫描时探针对于细胞活性的影响.pdfVIP

维普资讯 第22卷 第2期 电 子 显 微 学 报 Vol一22．No．2 2003年 4月 JournalofChineseElectronMicroscopySociety 2003—4 文章编号：1000—6281(2003)02—0092—05 扫描探针显微镜进行细胞扫描时探针 对于细胞活性的影响 韩 立 ，韩 冬 ，王秀凤 ，陈皓明 (1中国科学院电工研究所，北京 100080；2清华大学物理系，北京 100084) 摘 要：扫描探针显微镜 (scanningprobemicroscope，SPM)是近几年发展很快的一种形貌表征仪器。它的一个突出 优点是，可在溶液 中以很高的分辨率对细胞活体进行观察。不同于光学显微镜，SPM是利用探针和样品之间的相 互作用来扫描成像，探针对细胞有力的作用。这种作用力会在扫描过程中直接影响细胞的状态。为了研究SPM成 像过程中探针作用力对于细胞的影响，我们用 SPM的接触模式(contactmode)和敲击模式(tappingmoae)对培养液 中 的生物活细胞进行了较长时间的扫描观察。结果显示，尽管接触模式 SPM成像 清楚，但长时间的扫描会造成细胞 凋零；敲击模式 SPM进行长时间扫描时也会造成细胞变形，而细胞会以新的形态来适应外力的影响。 关键词 ：细胞 ；扫描探针显微镜 ；作用力 中图分类号：TNI6；Q24 文献标识码：A 近 l0年来SPM极大地促进了表面分析技术的 约承受 1个大气压左右的压强)。因此 ，SPM扫描过 发展。相对于其他测量手段 (例如扫描电子显微镜 程中探针将给细胞表面施加非常大的压力，肯定会 必须要求在真空中工作；光学显微镜的分辨率有限) 对细胞发生影响。我们设计了一种实验方案，利用 而言，SPM的独特优点是：对于样品环境的要求低， SPM的不同工作方式在活细胞表面进行连续扫描， 甚至可以直接在溶液中工作；在纳米尺度下对处于 观察活细胞在针尖的作用下发生的改变，并以细胞 生理条件下的生物样品表面进行直接观察；在研究 的改变和是否可以恢复作为细胞活性的判据，从而 生物活体结构和生物变化过程中可以在分子水平上 获得观察活细胞所应满足的实验条件。 ’ 蛋白 兰 。 表面细节结构 。 竺 2实验方法 。 SPM在研究生物的生理动态过程的 一 一～ 一 同时给出结构和功能信息 (例如酶活性，receptor一 实验是在美 国DigitalInstrument公司的D3100 ligandinteractions和摩擦力现象)。在生物领域 中 型SPM上完成的。采用D3100的TappinginFluid技 大有用武之地。 术在细胞的培养皿中进行直接扫描，在不改变细胞 1 厦王里 的活性条件下观察细胞的形态变化。细胞 由清华大 叼、垃 学物理系韩冬提供。实验过程如下：将长满大 白鼠 利用 SPM对生物样品进行研究时，探针和样品 脑微血管内皮细胞的培养皿放人扫描探针显微镜， 之问有相互作用，因此必须确定这样的作用力对生 细胞培养皿放置在恒温板上 (温度控制在 37oC)。 物活体有何影响。特别是成像过程中是否会造成生 为了保证培养液的酸碱度，必须在培养皿上方不断 物活体的改变，将直接影响SPM在生物研究中的应 添加CO。实验中保持所有条件不变。通过控制周 用。对于接触模式 SPM而言，要得到清晰的图像， 围的环境 、气氛和温度，使其和培养箱中的条件一 针尖悬梁必须有5～10nm的形变，这种形变将会使