枯草芽孢杆菌中GTP合成途径的代谢通量控制分析.pdfVIP

中文摘要 Control 代谢控制分析(MetabolicAnalysis，简称MCA)是一种以系统观点对 细胞内代谢调控进行定量分析的理论和实验方法。本文对枯草芽孢杆菌生产三磷 酸鸟苷(GTP)过程中的重要代谢途径进行了通量控制分析。主要分析对象为以 6．磷酸葡萄糖为节点的分支代谢途径、5一磷酸核糖为节点的分支代谢途径和 模型和瞬间代谢物法相结合的研究方法，通过计算通量控制系数阐明了各个反应 对GTP合成通量的控制作用。并进一步讨论分析GTP生成过程各个代谢组中全 部酶对GTP合成途径通量的综合控制效果，为基因工程提供了重要的理论依据。 在枯草芽孢杆菌RH33中，以6一磷酸葡萄糖为节点的分支途径为葡萄糖生成 6一磷酸葡萄糖途径J。，6一磷酸葡萄糖生成丙酮酸途径J。，6一磷酸葡萄糖生成GTP 途径J。。相应的催化三组反应的酶对GTP生成通量的控制系数分别为C3。=-0．539， 6一磷酸葡萄糖生成GTP的代谢途径。因此，对这一反应组进行更加详细的代谢分 析，希望可以进一步获得GTP生成途径的通量控制系数分布情况。 以5一磷酸核糖为节点的分支途径为6一磷酸葡萄糖生成5一磷酸核糖途径J” 5一磷酸核糖转化为3一磷酸甘油醛和6一磷酸果糖的途径J。，5一磷酸核糖生成GTP途 径J3。相应的催化三组反应的酶对J。的控制系数分别为C。l=0．125，C。：=O．112， C。。：O．763。因此，我们对5一磷酸核糖生成GTP代谢途径中的重要线性途径作了进 一步分析。 是生成GTP的直接途径。经通量控制分析得：这一途径中的四个反应步骤对线性 性途径中，通量控制作用主要分布在前三步反应中，且分布较均匀。从整条途径 考虑，这三步可以做为进行代谢工程操作以提高GTP产量的突破点。 关键词： 枯草芽孢杆菌三磷酸鸟苷代谢通量控制通量控制分析 ABSTRACT MetabolicControl a andan Analysis(MCA)isquantitativeanalysistheory withthe viewformetabolic and experimentalmethodologysystemic regulation control wascarriedoutforthe aroundmetabolite contr01．Flux analysis pathwayskey thelinear inBacillus．subtilis branchand point pathway：IMP-XMP—GMP·GDP·GTP kinetic and metabolite top—down models transient using approach，Lining concentrations couldbeused雒ato for analysis guideidentifytargets approach．The metabolic atGTP engineeringaiming synthesizing． InBacillus．subtilis arethreebranchesaround R1-133，there of PP andthe of J1，the J2 syntheticpath