肿瘤多细胞球：一种近似实体瘤的体外肿瘤模型.pdfVIP

第 3O卷 第 6期 电 子 显 微 学 报 Vo1．30．NO．6 2011年 l2月 JournalofChineseElectronMicroscopySociety 2011一l2 文章编号：1000—6281(2011)06~552-05 肿瘤多细胞球 ：一种近似实体瘤的体外肿瘤模型 蒋 乔 ，薛 雪，马会利 ，邹国漳，梁兴杰 (国家纳米科学中心，北京 100190) 摘 要 ：本文介绍 了一种简便 易行的方法，用以在体外建立近似体 内实体瘤的肿瘤模型——肿瘤多细胞球模型 (multicellulartumorspheroids，MCTSs)。采用液滴重叠法 (1iquidoverlaymethod)来构建HeLa肿瘤多细胞球模型 ，并 在光镜下对肿瘤多细胞球的生长状况进行观察描述 ，再应用场发射扫描 电镜和透射 电镜观察 MCTSs对肿瘤多细胞 球 的外部和 内部超微结构及双光子激光共聚焦荧光显微镜对活细胞球进行激光层切 ，建 MCTSs的三维立体形貌 。 还利用该模型对于表面不同电荷 的量子点进行筛选 。结果表 明，该模型的建立相对简便易行，并具有明确形态学 表征 ，可广泛应用于对抗肿瘤药物和纳米材料进入肿瘤方式和作用机制等研究。 关键词 ：肿瘤多细胞球 ；三维细胞培养 ；量子点 中图分类号 ：R73—3；Q336 文献标识码 ：A 近年来 ，作为药物研究和生物学研究的有效 型进行了系统的观察。同时，利用多光子显微镜对 手段，三维细胞培养系统因而备受关注。较 比传 于不同表面修饰 的量子点对 MCTSs的渗透行为进 统的贴壁细胞培养 (二维细胞培养)，离体细胞在 行考察。结果表 明，可构建的一系列方法能够对于 三维立体培养的状态 中，其形态和功能更加近似 该模型进行系统 的形态学描述 ，同时，该模型对于 于动物体 内活细胞的真实生长状况…。肿瘤多细 纳米材料和抗肿瘤药物 的进一步研究具有独特 的 胞球 (muhicellulartumorspheroids，MCTSs)是一种 优势。 经典 的体外三维肿瘤细胞培养模型，通过模拟三 1 材料和方法 维细胞网络 、细胞与基质 、细胞与细胞之间的相互 作用 ，从而能模拟人类肿瘤组织 中相应 的病理生 1．1 HeLa-MCTSs模型的构建 理学特性 ，该模型已被应用于抗肿瘤药物研究中， 利用液滴重叠法构建 HeLa．MCTSs。HeLa细胞 依据其形态和生长动力学特性 ，MCTSs近似于肿 预先贴壁培养 (DMEM高糖培养基 ，10％胎牛血清 ， 瘤发生早期的无血管瘤或实体瘤组织 中远离血管 1％双抗)于 lOOmm平皿 中，融合度至 70％ ～80％ 的区域 o 时以胰蛋 白酶消化 ，调整细胞悬液浓度为 62细胞／ 尽管三维细胞培养更贴近动物细胞体 内生长 孔 ，125细胞 ／：fL，250细胞 ／*L，500细胞 ／孔 ，1000 的形态和功能，应用于药物筛选与作用机制研究 细胞／孔 ，在预先包被琼脂糖 的96孔板 中以上述浓 时，能够更好的模拟药物与肿瘤作用 的真实状况 ， 度接种 ，37℃培养 ，隔 日换液拍照。 但仍有大量细胞生物学和分子生物学研究仍然采 1．2 HeLa-MCTSs模型的形态学观察 用二维细胞培养方式建立模型。这是 由于单层贴 小心收集 HeLa．MCTSs，PBS清洗 ，5％戊二醛 壁 的细胞的培养和检测相对容易，而对于三维培养 固定过夜 ，梯度乙醇脱水后转入 乙酸异戊酯 中，二 的细胞，如MCTSs模型，由于其类似于组织样 品，具