表面纤溶系统的理研究及其在冠脉支架表面的构建.pdf

摘要 近年来，血液接触材料在心血管疾病的临床治疗中得到了飞速的发展。但 其作为异体材料，植入人体时所引起的血栓问题至今仍未得到妥善解决。大量 研究证实，任何一种异体材料在与血液相接触时都会不可避免的引起凝血反应。 因此，一些研究者试图通过合理的设计在材料表面模拟人体纤溶系统，赋予材 料溶解初级血栓凝块的能力。表面纤溶系统的构建为实现真正意义上的抗血栓 材料提供了一种全新的思路。构建表面纤溶系统的关键在于使材料能够从血液 中选择性结合纤溶系统核心蛋白质——血纤维蛋白溶酶原(Pig)及其激活剂(如 组织型纤溶酶原激活剂(t．PA))，通过二者之间的相互作用产生具有降解纤维蛋 白活性的纤维蛋白溶酶，实现对初生血栓的溶解。目前，人们普遍认为￡．氨基 和羧基自由的赖氨酸(￡．赖氨酸)对Pig及t—PA具有特异性亲和力，因此，￡一赖 氨酸在材料表面的固定将有可能实现表面纤溶系统的构建。 基于上述分析，本论文的主要工作是将￡．赖氨酸引入到材料表面，实现表 面纤溶系统的构建，并试图从蛋白质水平阐述其作用机理。在此基础上，将￡． 赖氨酸化表面的概念应用到冠脉支架上，实现表面纤溶系统在心血管植入材料 表面的构建。具体研究内容如下： 首先制备了￡-赖氨酸和a．赖氨酸(a．氨基和羧基自由的赖氨酸)修饰的模型 金表面，并系统研究了二者与P培之间的相互作用。采用自组装二肽分子 赖氨酸在模型金表面的固定。利用水接触角和椭偏厚度测试对改性表面的性质 进行表征。通过酶联免疫吸附法(ELISA)比较血浆中的Pig在两种赖氨酸化表 面的吸附情况，证实￡-赖氨酸确实能够实现对Pig的选择性结合。通过表面等离 子体共振仪(SPR)考察了不同浓度的Pig在两种赖氨酸化表面的动态结合过程。 结果表明：￡-赖氨酸化表面对Pig具有更高的结合速率常数和更低的解离速率常 数，其亲和常数接近于q一赖氨酸化表面的15倍，从结合动力学的角度进一步证 实￡一赖氨酸对Pig具有更高的特异性亲和力。利用纤维蛋白溶酶活性测试，证明 该￡．赖氨酸化表面结合的Pig具有更高的纤溶酶转化活性。该研究通过最简单的 表面设计，证实了8-赖氨酸是实现纤溶表面的关键结构，为后续纤溶功能材料 的制备提供了理论依据。 接下来将对Pig具有特异性亲和力的￡．赖氨酸固定在冠脉支架表面，实现表 面纤溶系统在心血管植入材料表面的构建，并对其血液相容性进行了系统研究。 采用表面引发原子转移自由基聚合法在L605钴铬合金支架表面聚合甲基丙烯酸 射线光电子能谱测试证实整个改性过程的成功性。同位素标记的纤维蛋白原及 白蛋白吸附测试表明poly(HEMA)修饰的L605表面具有极好地排斥非特异性蛋 够从血浆中选择性结合纤溶酶原。血浆复钙化测试证明该赖氨酸化表面结合的 Pig经t-PA激活后能够有效地溶解血浆中的纤维蛋白凝块，而且该纤溶能力具有 一定的稳定性和可再生性，即能通过Pig在表面的动态交换保持其活性，进而实 现对初生血栓的多次溶解。本研究为解决支架内血栓问题提供了一种的新的思 路，同时也为纤溶表面的临床应用奠定了重要的基础。 关键词：表面纤溶系统，￡．赖氨酸，血纤维蛋白溶酶原，冠脉支架 Ⅱ Abstract materialsinducedorendothelial remains inducedthrombosisa Foreign injury severe inthe ofbloodcontactdevices．Preventionof problem development to a is notbe when surfaceincontactwith coagulationappears possibleforeign blood； alternative the ofaclot surfacehasthereforebeen conc