球虫DNA疫苗研究..ppt

球虫DNA疫苗研究 李祥瑞 南京农业大学动物医学院 第一部分 DNA疫苗概述 一 DNA疫苗的概念 DNA疫苗（DNA vaccine） 核酸疫苗（nucleic acid vaccine） 裸DNA疫苗（naked DNA vaccine） 不需要任何化学载体 称为DNA免疫（DNA immunization） 核酸免疫（Nucleic acid immunization） 基因免疫（gene immunization） 遗传免疫（genetic immunization） 一 DNA疫苗的概念 将含有编码外源蛋白基因的质粒DNA，直接导入动物组织，外源基因在体细胞中表达后，表达产物被递呈，与MHC分子结合，刺激机体产生相应的抗体和细胞毒性T淋巴细胞，分别介导体液免疫和细胞免疫应答。这种外源基因是抗原的来源，具有疫苗的功能 一 DNA疫苗的概念 1988年，美国Wisconsin大学的Wolff等做小白鼠基因治疗试验时，偶然发现将编码有蛋白质抗原的质粒DNA直接导入动物细胞内，能在动物细胞内表达外源抗原，促使机体产生细胞免疫反应和体液免疫反应，称之为DNA免疫 1989他们申请了专利 1990年正式发表 1994年在日内瓦召开的专门会议上定名为DNA疫苗 WHO建议使用核酸疫苗免疫（nucleic acid vaccination） 1995年，《Biotechology》（现在的《Nature Biotechology》）的特约编辑Bernard Dixon称之为“第三次疫苗革命”。从此DNA疫苗成了研究的热点 二 DNA疫苗的优点 1 诱导平衡的体液免疫和细胞免疫 诱导细胞毒性T细胞的杀伤作用 诱导产生体液免疫 由质粒转染细胞产生的蛋白质在动物机体细胞内能按其天然构象进行折叠，从而有利于中和抗体的产生，同时，由质粒DNA指导合成的多肽可被带到细胞表面并通过MHC I类分子表现出来，这是诱导细胞毒性T细胞作用的关键步骤 二 DNA疫苗的优点 2 可以构建多价疫苗 DNA免疫所诱发的免疫应答是针对目的基因编码的蛋白，而不是抗载体DNA 这意味着质粒载体DNA可重复利用 联合疫苗甚至包含各种病原体的万能疫苗 将编码不同抗原基因构建在同一个质粒中，或将不同抗原基因的多种重组质粒联合应用，制备多价核酸疫苗 二 DNA疫苗的优点 3 免疫时间长 由于质粒DNA可长期在宿主细胞内表达，可不断强化B细胞和T细胞免疫记忆应答，从而使机体获得持续的保护性免疫 质粒载体中包含了某些免疫刺激核苷酸序列，如CpG DNA，可诱导强的细胞免疫 二 DNA疫苗的优点 4 成本低、稳定、便于储存和运输 可以在工程菌中大量繁殖 纯化重组DNA比蛋白质纯化技术要简单得多 DNA疫苗的生产比传统疫苗的制备要简单，且成本低 DNA疫苗在常温下非常稳定，有利于储存运输 二 DNA疫苗的优点 5 安全 DNA疫苗蛋白质抗原在宿主动物细胞内表达，无毒力回升的危险 不必担心对病毒性载体的免疫应答和载体对机体的不良影响 外源DNA很少会整合到宿主染色体中 二 DNA疫苗的优点 6 对免疫功能低下者效果较好 DNA疫苗可以和多重免疫调节因子共同使用，对免疫功能低下者有较好的作用 二 DNA疫苗的优点 7 可以激发特定的Th1或Th2免疫应答 与细胞因子联合应用 三 DNA疫苗的潜在危险 导致肿瘤形成 通过整合到染色体中来诱导肿瘤形成 长期表达抗原，导致不良后果 免疫耐受、自身免疫、过敏反应 抗DNA抗体形成 有自身免疫倾向或自身免疫疾病的个体容易产生 四 DNA疫苗的免疫学基础 质粒DNA直接转染体细胞 表达抗原蛋白，然后通过MHC ?进行抗原递呈 专职抗原递呈细胞（APC）递呈肌肉细胞表达的外源抗原 抗原在肌肉细胞内表达后，分泌到肌肉细胞外，被APC吞噬，然后递呈 质粒DNA直接转染APC 五 DNA疫苗研制的技术路线 1 目的基因筛选 通常选择主要保护性抗原基因，最好是对多个毒株都有保护性的抗原基因 可以是单个基因或具有协同保护作用的一组基因，也可以是基因片断 该抗原基因遗传分子机制已经清楚 该基因已经被克隆，且表达调控机制较为清楚 五 DNA疫苗研制的技术路线 2 载体的选择 载体的作用主要有两个方面 载体中含有调节基因复制、表达的调控元件，使目的基因在宿主细胞内能够得到适量表达。 作为一种携带目的基因的工具，便于导入宿主细胞