柿果ACC氧化酶基因cDNA克隆及其植物表达载体的构建.pdf

摘 要 柿果属于跃变型果实，采收后极易软化，给柿果的贮藏运输带来不便。大 量研究证实，乙烯是跃变型成熟果实的催熟激素。跃变型果实中自我催化的乙 烯合成反应启始后，合成大量乙烯。利用转基因技术抑制或降低果实乙烯的生 物合成，可以降低果实乙烯的含量。ACC合成酶和ACC氧化酶是果实乙烯生物 合成的限速酶，通过转基因的方法抑制这两种酶的表达，可望提高跃变型果实 的耐贮性能。本研究以柿果实为材料，克隆分离了富有柿ACC氧化酶基因，成 功构建了该基因的反义和RNA干扰表达载体，结果如下： Mini 1．利用Rneasy回PlantKit试剂盒成功提取了高质量的RNA，RNA的 OD2c,o／OD2so比值为2．0979，为mRNA的反转录奠定了基础。 RT Ⅺt)，分离到完整性好的mRNA，为继后的RT-PCR提供可靠保证。 3．根据已发表的平核无柿ACC氧化酶的保守氨基酸序列，设计了一对特异 DK-AC01基因核苷酸序列及所编码的氨基酸序列同源性达98％，说明克隆到的 片段是富有柿果ACC氧化酶基因片段。 4．通过分析已获得ACC