山羊c-Myc基因原核表达及多克隆抗体和单克隆抗体制备.pdf

山羊c-Myc基因的原核表达及多克隆抗体和单克隆抗体的制备 摘要 c—Myc是一种重要的原癌基因，它可以作为一种转录因子，在维持胚 stem 胎干细胞的生物学特性和诱导多性干细胞(induced cells， pluripotent iPS)形成的过程中发挥重要的作用。因此制备其相应的多克隆抗体和单克隆 抗体非常必要，这将为进一步研究山羊ES细胞和iPS细胞的自我更新机 制奠定基础。 SDS．PAGE电泳及Western blot加以验证。在变性条件下用Ni．NTA 大白兔，间隔2．3周注射1次，共4次。最后一次免疫后7天，采血分离血清， 用Western 融合蛋白； 获得的多克隆抗体与His．Myc融合蛋白能够特异性结合。结 论：本试验成功获得了特异性山羊c．Myc多克隆抗体。 的雌性BALB／C小鼠，经过四次免疫后取小鼠脾脏细胞与SP2／0骨髓瘤细 胞进行细胞融合。采用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞，应用有限稀释法 对其进行3．4次亚克隆，获得稳定分泌抗C．Myc蛋白抗体的杂交瘤细胞株， 并将其腹腔注射BALB／C小鼠。7—1O天后采集腹水，间接ELISA测定腹水抗 体效价，以单克隆抗体亚类鉴定试剂盒测定抗体亚类。结果表明：(1)获 1F10、2H10两株杂交瘤细胞在小鼠体内诱生的腹水抗体效价分别为 1类。(3)核型分析表明，杂 1：1280000和1：640000，抗体亚类均属于IgG 胞株体外传代和冻存复苏后的培养液上清OD值基本保持不变，抗体分泌稳 定，证明山羊c。Myc单克隆抗体制备取得满意结果。 多克隆抗体 分子克隆 原核表达 蛋 关键词：山羊c_Myc基因 白纯化单克隆抗体 of Geneand of ProkaryoticExpression c—Myc Preparation and Polyclonal Monoclonal Anti-—C·-MycAntibody Anti—-C--Myc in Hircus AntibodyCapra ABSTRACT isa akindof c—Myc importantprotoncogene．As factors，It transcription an rolein characteristicsof playsimportantmaintainingbiological embryonic stem induced stem is cells(EScells)andpluripotentcells(iPS cells)．Iturgently to its and necessary