整合素ανβ6抑制顺铂促卵巢癌细胞凋亡及研究.pdf

中文摘要 V13 整合素n 6抑制顺铂促卵巢癌细胞凋亡的研究 攘 要 目的：化疗在卵巢癌的治疗中发挥着非常照要的作 用，这是包括手术、放疗和其他治疗都不能代替的治疗方 式。优疗效果豹好坏直接关系到患者的生存与生活矮量， 面卵巢癌的内在性耐药和获得性耐药是临床i二常见的难 题，如果能克服这一难题，无疑将会给卵巢癌患者提供新 的治疗机会。遗憾的是迄今为止，卵巢癌觞黼药移l潮仍不 是十分渣楚。多数化疗药貔是通过诱导细胞凋亡嚣起到杀 死肿瘤细胞的目的。目前有～种假说认为肿瘤细胞产生了 抵抗细胞凋亡的能力就产生了耐药性。细胞凋亡是一个非 常复杂的过程，受多种辫素的调节和箭约。肿瘤绷簏的生 存微巧境是毒#常复杂豹，其捌爨被纲胞外基质 (extracellular 分子与ECM发生粘附。整合索即是其中的一种粘附分子， 不同亚鹜的整合素与不黼的ECM褶结合，从丽维持细胞 的生理活动。失去了糙附能力的纲胞熨易于走向凋亡。近 年来，整合素与ECM的相互作用对细胞凋亡的影响越来 越受到人们的重视。在肿瘤细胞的生长过程中整合素可以 通过抑制细胞凋亡而调节肿瘤的发生发展。整合索还可以 _{枣豢l多秘他疗药物诱导豹凋亡，使细胞瑟重药。纲胞粘附介 导的细胞耐药(CellAdhesionMediatedResistance． Drug CAM。DR)已作为～固定名词被科学家提出。多数整合素 在人体组织中广泛表达，但是整合素旺v§6在上皮性恶 中定摘要 性肿瘤中特辩表达，而在良性和正常组织rfI均4i表达，有 报道卵巢良性肿瘤组织和正常缀织中整合素Qv§6不寝 达，两恶性蒡孛瘤中高表达，且积分期密甥提关，絮捌越晚 表达越赢，并且认为整合索av136可以作为卵巢癌恶性 程度的标志。卵巢癌化疗的一线药物一顺铂(DDP)，也 是通过诱导细胞满亡丙达瑚杀死肿痛细胞的作开j的。本研 究撅用三抹体努培养憋襄纂癌细胞系徽磷究对象，观察整 13 合索Ⅱv 6对顺铂诱导的卵巢癌细胞凋亡的影响，并分 析可能涉及的途径，以探讨细胞粘附在卵巢癌化疗耐药性 产生中的作糟。 中24小时，溺流式细胞术方法检测三株细胞中整合素av 多6的表达。经不羁浓度的DDP作耀48小时矮，蹋噻矬 兰(MTT)方法检测DDP对细胞增殖的抑制情况，用酶 双荧光染色法检测细胞凋亡情况，筛选高合适的DDP浓 度。用筛选出的DDP浓度刺激生长予纤维糙连蛋自 v 细胞株和用整合索Q B6特异性阻断抗体阻断后的生长 予FN上的卵巢癌细胞的凋亡情况。用流式细胞术方法检 3-kinase．PIm3K)的表达。 结果：一、用流式细胞术方法检测发现卵巢癌细胞 中文摘要 SK0v3、AO、3AO均表达oV136整合索，但表达水3F的 高祗差异无显著性PO．05)。二、蹶锫对卵巢癌细脆增 率受到抑制，且呈浓度依赖性，顺铂浓度越高抑制越明 3AO均可出顺铂诱导凋亡，即使最低浓度的顺铂(5微克 ／毫升)也可诱导细胞凋亡，且呈现浓度依赖性(P0．01)。 3、AO／EB双荧光染色法：对照组细胞以正常细胞为主(核 被AO染色，橙黄绿色喜￡色荧光，密度不均，呈现结构 样特征)，有少量早期掇亡的细胞(核奠；被AO染色，但 染色增强，荧光亢进，呈均匀一致的绿色)；试验组(DDP 组)5微克，毫升DDP作用组仍以正常细胞为主，早期凋 亡细脆毙对照维多，凌亡率=lO％：随DDP浓度加大，正 常细胞减少，凋亡细胞增多，lO微克／毫升DDP作用组即 可见到晚期凋亡细胞(核被EB染色呈橙红色，可见核的 正常细胞更少，晚期撼亡纲脆更多，霹觅凋亡夺体，并哥 见塥死细胞(核被EB染色呈橙红色，结构不清，细胞体 积增大，边缘模糊)凋亡率=37％，三个浓度诱导细胞凋 整合素GV多6抗体对灏铂诱导晌舞巢癌缀稳溺亡的影 后，试验组(生长于FN组)凋亡率明显低于对照组(生 V §6阻断抗体封}ij后的纲施生长予FN后，凋亡率