pf40基因产物的亚细胞定位以与功能及研究.pdfVIP

摘要 植物的顶端优势是顶芽完全或部分抑制侧芽生长的现象。植物的分枝和株型在很大程度上 受到顶端优势的影响。随着分子生物学的发展，人们有机会应用转基因植物和突变体从不同角 度对顶端优势作用机理进行深入研究。 发现其与编码离子通道蛋白及一些内膜蛋白基因的核酸序列相似性很高，并且蛋白产物的氨基 酸序列也很相似。不仅如此，PF40与离子通道蛋白ZIP家族在跨膜拓扑结构上极其相似。由于 PF40与ZIP家族在一级结构和高级结构上均非常相似，推测PF4D可能属于Z1P家族。 PSORT软件预测PF40可能定位在内膜系统，具有跨膜区域，N端有信号肽序列。为了确 定PF40的亚细胞定位，构建了含pf40与报告基因dp的融合基因的表达载体，由农杆菌介导 转化烟草，PCR、Southern杂交证明外源基因整合到基因组中。用荧光显微镜观察，发现PF40 的亚细胞定位是在围绕核的内质网以及胞质网格状内质网上。免疫胶体金标记实验进一步证明 PF40定位在内质网。 为了确定PF40的内质网定位区段，构建了pf40的4个不同长度的缺失片段(f12、f14、 f56、f36)与报告基因加连接的植物表达载体，由农杆菌介导转化烟草。用Confocal及荧光 显微镜观察，发现N端缺失造成蛋白不能正确定位到内质网上