抗猪轮状病毒VP6单克隆抗体的制备鉴定.pdfVIP

摘要 摘 要 本研究用纯化的重组PRVVP6蛋白作为免疫原，免疫8周龄BALB／c雌性小鼠，运用淋 巴细胞杂交癯技术，通过问接ELISA筛选，采用有限稀释法。经过4次克隆筛选，获得了 一株稳定分泌抗PRV 类．杂交瘤细胞的平均染色体数为93，细胞培养液上清及腹水效价分别为1：800和1： I×106，且C。鼠。单克隆抗体不与猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪伪狂犬病 病毒发生交叉反应，显示良好的特异性。 用抗PRV 进行了间接免疫荧光检测病原的比较研究：M?Ab所进行的间接免疫荧光染色后，PRV感染 细胞培养物中多数细胞在其胞浆和细胞膜上出现绿色闪亮荧光，且荧光强度强，未接种病 毒的细胞培养物未见有绿色闪亮荧光染色的细胞存在；利用PRY全病毒制备的抗血清对接 种病毒和未接种病毒的细胞培养物进行间接免疫荧光试验表明．接种病毒的细胞培养物染 色质．荧光强度强，但未接种PRY的细胞培养物亦有一定的非特异性荧光反应。结果表 VP6蛋l白McAb进行间接免疫荧光法对病原检测具有很高的特异 明，利用所研制的抗PRY 性。 c5D。单克隆抗体与其他腹泻病病毒之间的特异性反应实验及免疫荧光(IFA)实验结 果亦表明，所制备的抗猪轮状病毒VP6蛋白单克隆抗体具有良好的特异性。CsD·o单克隆抗 体制各成功为PRV疫情监测和准确快速的病原诊断与鉴别诊断奠定了物质基础。 关键词：轮状病毒：VP6：单克隆抗体；t间接免疫荧光 PREPARATl0NAND 0FMONOCLONALANTIBODIES AGAINST PoRCINEVOTAVIRUSVP6 Abstract Inthis mleewere with mcombinantPRVVP6 experiment，BALB，c iWnunizedpurified werescreenedindirect the protein，hybridomasupematants by ELISA，usinghybridomatechnique andthe celllinenamed wasobtainedafter dilution，one w four-time limiting hybridoma CsDlo couldsecretemoneclonal PRV,Theof subclone，which against antibody(McAb)specificisotype theMeAbwas numb盯ofcllromosomasWas ELISAtitersofculture IgGl，theaverage 93，the X andasciteswereI：800and1：1 McAbdidntreact supematants 10。。respectively．The with transmissible virus diarrhea gastroenteritis frOEV)，porcineepidemic thatthe has resultsshow