浆细胞样树突状细胞在慢性乙型肝炎发病机制中的作用及研究.pdf

缩略语 摘要 浆细胞样树突状细胞在慢性乙型肝炎发病机制中的作用研究 硕士研究生：刘庆峰 导 师：王福生 毛远丽 摘要 dcIl蹦矗c 目的：观察浆细胞样树突状细胞@lasmacytoidcells，pDCs)在慢性乙型肝炎 病人体内的特点，分析其与临床病程的关系，初步探讨pDcs在乙型肝炎病毒 B cells， (h印atitisvims，HBv)感染发病机制中的作用，为树突状细胞(den嘶tic Dcs)疫苗的研制提供实验依据。方法：(1)应用免疫磁珠分选技术纯化7例慢性 bloodmononuclear 乙型肝炎病人和4例健康人外周血单个核细胞(P甜pheral ODN2216或cpGODN2006刺激剂共培养24h cells，PBMCs)中的pDCs，体外加入CpG 后，应用流式细胞仪分析刺激前后pDcs表面共刺激分子的表达情况，同时通过 定pDcs的免疫学特性。(2)应用流式细胞仪检测20例慢性乙型肝炎病人和15例 ODⅣ2216刺激其PBMcs， 健康人外周血Dc亚群和淋巴细胞亚群频率，并使用cpG 然后利用ELISA技术检测培养上清中IFN—n含量，分析HBv慢性感染病人外周血 pDcs频率、数量和功能的变化及其与临床病程的关系。(3)应用免疫组化技术和 流式细胞分析技术等观察ll例慢性重型乙型肝炎病人和4例健康人外周血和肝脏 授润淋巴细胞(Liver infil蛳ing 的差异。结果：(1)应用免疫磁珠分选技术可以得到纯度大于95％的pDcs。cpG ODN2006刺激pDcs高 0DN2216可以刺激纯化的pDcs产生大量的IFⅣ一a，而cpG 0DN2216刺激慢 表达共刺激分子cD80、cD86、CD40和cD83；与健康人比较，cpG 性乙肝病人纯化的pDCs产生的IFN—n的能力明显降低。(2)与健康人比较，慢 ODN2216刺激 性乙型肝炎病人外周血中口DCs和NK细胞频率明显下降，并且cpG PBMcs产生IFN—n的能力也显著降低；相关性分析表明，慢性乙肝病人pDcs频率 与ALT呈明显负相关，但与血浆病毒载量无明显相关。(3)慢性重型乙型肝炎病 2 摘要 炎病人肝组织中pDCs浸润显著增加。虽然慢性重型乙型肝炎病人LILs中pDCs 百分含量较PBMCs为高，但LILs经过CpGoDN刺激后产生IFN—o量却明显低于 ODN 刺激PBMcs后的产生量。结论：pDcs是人体最主要的IFN一Ⅱ产生细胞，cpG 可以刺激pDCs成熟并分泌大量IFN—a。慢性肝炎病人外周血pDCs频率和功能明 显下降，这可能由pDcs迁移到肝脏导致，而损伤的pDcs可能是乙型肝炎病毒持 续感染重要致病机制。探索恢复乙型肝炎病人pDcs数量和功能的机制，可以为细 胞免疫治疗提供实验基础。 关键词浆细胞样树突状细胞(pDcs)；乙型肝炎病毒(皿V)；免疫磁珠分选 (MAcS)：CpGoDN；IFN—a；流式细胞分析术；免疫组化技术；