控制水稻花期OsEF1基因功能与研究.pdf

摘要 水稻是世界上最重要的粮食作物之一，也是研究禾本科植物和单子叶植物研究的模式作物。 随着水稻基因组测序的完成，大量水稻突变库的创建，加快了水稻理论研究的步伐，明显缩短了 基因克隆的周期，使水稻基因功能的研究进入了后基因组研究的时代。近年来，许多重要农艺性 状的基因被成功的克隆，如花期、育性、叶形、抗病性等。开花时间，在水稻中又称抽穗期，是 营养生长向生殖生长的过渡，所以对控制水稻开花基因的克隆，将有助于理解和完善水稻控制开 花的调控网络及分子基础，扩大水稻适应性栽培的范围，为育种工作的开展提供重要的遗传基础 和理论指导。 本文研究的材料基于实验室创建的10万份水稻突变体库中筛选到的一个早花突变体Osefl， 作用等基础上进行深入研究的。 首先，通过田间农艺性状的调查发现在自然长日照条件下，Osefl突变体开花时间明显早于 野生型，时间早30d左右，同时，突变体呈现半矮化的表型。 现OsEFl在根、茎、叶、幼穗、颖壳、侧根、结节，叶鞘、叶枕都有表达，石蜡包埋切片在叶片 和叶鞘的各个类型的细胞中也检测到了GUS活性，表明了OsEFl是一个组成性表达基因。同时 Real-Time PCR对上述组织进行相对定量分析，得出了类似的结论。 利用Quantitative Real-Time 第三，通过QuantitativePCR开展OsEFl光周期节律性分析。研究发现在短日照 下，OsEFl的表达贯穿整个白天和晚上，在黑夜之前有一个最低值，在光照之前出现峰值，从而 可以推断OsEFl是受光周期调控的基因，mRNA的表达呈昼夜节律性表达。 第四，为了更好的研究OsEFl蛋白的靶基因，将酵母双杂交实验筛选出的8个与OsEFl互 过农杆菌介导法转化日本晴，其中一个基因的转化群体中有3株表现早开花性状。 证明了表达的总蛋白即为目的蛋白；在非变性条件下，通过His镍柱小量亲和纯化发现150mM 的咪唑浓度较为适宜，大规模纯化并初定量后获得3mg蛋白，用于制备多克隆抗体，以进一步检 测突变体背景下内源蛋白水平的研究。OsEFl基因的克隆及功能的深入研究，说明了水稻在光周 期调控方面形成了独特和复杂的网络，与拟南芥相比，这些独特性和复杂性提供了水稻既能短日 照下开花，又能适应在长日照下正常开花。 关键词：早花，突变体，节律性，光周期 Abstract oneofthemost inthe also asthe sativa world，and Rice(OryzaL)is importantcrops regarded model inthestudiesof and the ofrice plant grassfamilymonocotyledon．Withcompletiongenorne of andestablishmentofa numberofricemutant theoreticalstudies libraries，the sequencing large pace ofrice Wasacceleratedandthe of one was rice shortened，the gene greatly periodcloninggene genorne researchwentintothe lotof traitswere