脓毒症大鼠生物喋呤的诱生规律及其已酮可可碱和山莨菪碱的干预作用.pdf

脓毒症大鼠生物喋呤的诱生规律及 己酮可可碱和山莨菪碱的干预作用 。 中文摘要 ： ， t 目的： 本课题采用大鼠盲肠结扎ff孑L(CLP)致脓毒症模型： 1．动态观察循环及组织中内毒素、四氢生物喋呤(BH。)、一氧化 氮洲0)和血清中肿瘤坏死因子．a(TNV．0【)的含量，同时观察组织 症病理过程的关系；2．初步探讨单独或联合应用己酮可可碱 fPTX)和山莨菪碱对生物喋呤诱生的影响及机制．本课题通过以 上研究，旨在探讨BH4在脓毒症发生、发展过程中的变化规律、 作用特点及其与组织损害的关系，并从分子水平初步探索PTX 与山莨菪碱在脓毒症治疗中的机理，为脓毒症的治疗提供理论依 据。 ／ 方法：雄性Wistar大鼠78只，随机分为5组：1．正常对照组 时活杀，各时间点均为6只动物；3．PTX治疗组(n=18)：模型复制 同2组，分别于术后0．5小时经阴茎背静脉及术后3、6小时经肌 ’ 。 小时活杀，各时间点均为6只动物；4．山莨菪碱治疗组(n=18)： CLP后给予山莨菪碱治疗，给药时间、途径及分组同3组，每次 后给予PTX与山莨菪碱联合治疗，给药时间、途径及分组均同3 组，剂量同前两组。每组动物均留取肝、肺、肾组织和血标本。 采用鲎试验基质显色法测定血浆及组织内毒素水平；ELISA法测 定血清TNF．＆含量；循环及组织内BH4和NO水平分别采用反相 高效液相色谱法和Griess，比色法测定；采用半定量RT．PCR方法 检测组织GTP-CHI、iNOS、TNF一Ⅸ的基因表达；并检测主要脏器 功能及肺组织髓过氧化物酶(MPO)N性。 …结果：1．CLP后2小时循环内毒素迅速升高，其后有所下降， 16小时又出现回升；肝、肺组织内毒素也显著升高，肝组织于8 小时达峰值后稍有下降，肺组织呈持续升高趋势；肾组织内毒素 无显著性变化。相关分析表明，循环内毒素与TNF．a、NO及肺组 织MPO活性显著相关。PTX治疗可显著降低CLP后2小时循环 内毒素水平，当与山莨菪碱联合应用时亦能起相同作用；单独应 用山莨菪碱对内毒素无显著影响。2正常情况下，动物肝，肺、肾 等组织均有少量GTP．CHI，iNOS基因表达及BH4和NO的产生。 CLP后2小时组织GTPC}Ⅱ基因表达和BH4水平明显升高，至伤 后16小时仍持续于较高水平；与之相应，组织iNOS基因表达和 N0水平亦明显升高；相关分析显示，组织GTP．CHI基因表达和 BH4水平与iNOS基因表达和NO的产生呈高度正相关关系。CLP 后早期应用PTX，术后2小时显著降低上述各指标；山莨菪碱治 疗仅显著降低术后2小时肺组织BH4和GTP-CHI基因表达、tNOS 基因表达以及术后2、8小时肝和肺组织NO水平；联合应用两药 与单独应用效果相似。3．CLP后2小时循环TNF．伐水平显著升高， 8小时迅速下降，16小时不能测出；肝、肺组织TNF．amRNA于 术后2小时显著升高，并持续至伤后8小时。PTX完全抑制循环 TNF．仅，并显著降低肝、肺组织TNF．Ⅸ基因表达；山莨菪碱仅显 著降低肺组织TNF．0【基因表达；联合应用两药与单独应用PTX效 MPO活性均明显升高。PTX可明显降低GPT、GOT水平及肺组 织MPO活性；山莨菪碱仅对肺组织MPO活性有显著影响；联合 应用两药与单独用两药效果相似。5．相关分析结果表明，组织 mRNA、iNOS TNF．0【mRNA与组织GTP．CHImRNA表达显著相 Bth、NO水平与血清GOT、GPT含量也显著相关。 结论：1．CLP导致严重腹腔感染，引起循环内毒素急剧升高， 肝、肺等组织内毒素积聚，可诱发多器官功能损害。2．脓毒症发 。病过程中，内毒素可刺激机体炎症介质TNF．0cmRNA广泛表达， 两者均可从基因水平诱导BH4合成的首要限速酶GTP-CHI基因表 达，从而促进体内BH4的合成；BH4作为NOS重要的辅因子在基 因和蛋白双重水平调控iNOS所介导的NO大量生成，参与脓毒症 时组织损害及循环障碍。3．脓毒症早期给予PTX和山莨菪碱治疗 均可在一定程度上千预生物喋