不同物理因素对离体人肝癌细胞系HepG2杀伤效应研究.pdf

锈≥ 中山大学硕士论文 不同物理因素对离体人肝癌细胞系HepG2杀伤效应的研究 不同物理因素对离体人肝癌细胞系HepG2杀伤效应的研究 中山大学附属第 一医院肝胆外科 硕士研究生： 张昆松 导 师： 梁力建教授 摘要 原发性肝癌中905以上为肝细胞癌(HCC)，而目前手术切除仍是肝癌治疗中 的首选手段。但肝癌切除术后复发率极高，单纯切除后的5年复发率高达50％以 上，而其中肝外转移者又以腹腔转移为最多…。。现代肝癌根治术应包括充分的 原发肿物和／或肝切除，彻底的淋巴结清除，完全的消灭腹腔游离癌细胞(free Cancercell，FCC)，此三点中任何一方面均不容忽视。虽然腹腔内FCC不一定 形成种植，但腹腔是FCC生存的良好环境，肿瘤细胞散落在网膜组织、胃壁、肠 管壁、系膜及腹膜上，获得一定的营养血供后即能形成肿瘤。在手术的探查、切 除过程中，癌细胞的脱落并种植于腹腔是客观存在的事实，由此影响HCC的治愈 率及复发率。消除腹腔内游离癌细胞和残存微小癌灶对改善患者预后有重要意 义。肝癌自发性破裂出血是原发性肝癌常见并发症之～。肝癌破裂时，大量的癌 细胞脱落进入腹腔，成为FCC，成为目后复发的潜在病灶。对于HCC脱落细胞的 腹腔内种植，已引起外科医生的重视，术中避免触摸肝脏肿瘤以及减少对肿瘤挤 压的肝切除手术已在临床实施。如果能有效地杀灭腹腔游离癌细胞(FCC)，将对 减少由FCC所导致的肿瘤复发有重要的意义。 高热对正常细胞和肿瘤细胞均有杀伤作用，而乏氧的肿瘤细胞比正常组织细 胞对热更敏感，且不同肿瘤对高温的作用反应差别很大。因此有必要了解不同肿 瘤细胞对加热的敏感程度，以提高热疗的疗效，而同时也能尽量避免正常组织的 损伤。肿瘤细胞通过细胞膜的跨膜物质转运功能，保持着细胞内、外液体离子浓 度、渗透压的平衡。当外界渗透压改变，必然将引起细胞内环境的改变，而由此 导致细胞功能的改变。当此种改变尚可为细胞所代偿，则细胞尚可生存；失代偿， 《≥ 中山大学硕士论文 不同物理因素对离体人肝癌细胞系HepG2杀伤效应的研究 则细胞最终死亡。 目的本实验基于癌细胞自身乏氧环境的特点，以及在不同密度环境、温 度下易受损伤的原理，探讨不同温度、不同渗透压溶液以及不同作用时间对离体 人肝癌细胞系HepG2的杀伤效应。以期寻求一种确实可靠、操作简便的术中杀 灭FCC的方法，在预防HCC术后复发中发挥积极的作用。 材料与方法人肝癌细胞系HepG2，用接种传代第三日(即传代后的细胞 处于指数增生期时)的细胞收集做实验。采用完全随机设计析因实验：根据l临床 使用的经验，将“温度”按每3度设置一个检测点，即37。C、40。C、43。C、46 ℃四个点；“时间”按5分钟、15分钟、30分钟、60分钟划分；渗透压则根据 临床工作中常见溶液配置，故设置无菌蒸馏水、O．45％无菌盐水(低渗组)、o．9％ 无菌生理盐水(等渗组)、3％无菌盐水(高渗组)、PBS溶液各组。 实验组：按完全随机设计，根据排列组合共有4×5×4=80组，每组6例 (n=6) 对照组：包括阴性对照和空白对照，即以未经处理的细胞溶液为阴性对照， 以不含细胞的全培养液为空白对照，每组12例。 应用MTT法测定细胞指数。细胞指数(cI)=1一(实验孔的平均OD值一 空白组平均OD值1／(阴性对照孔的平均OD值一空白组平均OD值) 结果： (1)单独效应分析：对于细胞指数，不同温度间、不同渗透压溶液间、不同作 用时间之间的差异均有显著性意义。而在“温度”、“时问”和“溶液渗透 压”三个因素中，以“时间”因素影响最大。 (2)多重比较分析： 在温度轴上，除了40。C和43。C之间，其余各温度间差异均具有显著意义； 在溶液渗透压上，除了0．45％和3％的氯化钠溶液之间，其余各溶液间差异均有 显著意义；在时问轴上，不同作用时间对细胞指数的影响都具有显著意义，且细 胞指数随浸泡时间增加而上升。因此，在排除了交互效应的基础上，三种因素的 最佳组合，为“46。C一无菌蒸馏水一作用60分钟”试验组一一即46摄氏度时用 水处理1个小时达到了本次试验中引起调亡的最佳条件。 (3)交互效应分析：