茶树L组UDPG糖基转移酶基因的克隆及其原核表达.pdf

摘要 儿茶素是茶树重要次生代谢产物茶多酚的主体组分，也是决定茶叶品质的主要化 学成分。研究茶儿茶素合成途径中关键基因的功能，对茶树良种选育、茶叶品质调控 具有重要意义。 ∞瑾因进行全长克隆及生物信息学分析、实时荧光定量分析、目的蛋白的原核表达、 蛋白酶活性检测、反应产物鉴定等。 主要研究结果如下： Scratch Predictor网站软件，对三个基因的序列进行了比对，预测蛋白质的二级 protein 没有信号肽序列，蛋白质二级结构的元件数量和分布都非常相似，分别具有2个、4 个、2个二硫键。 基因在茶树叶片不同发育阶段、不同诱导处理、黄化苗去黄化过程中的表达情况。结 果发现它们的表达趋势差异不大；三个QW乃相对表达量在芽中最高；脱落酸 h后，o吣丁75EJ『、Q∞丁巧凹相对表达量相对于对 (ABA)、赤霉素和伤害处理1 照组明显降低。而激素和伤害处理48h后，西嬲丁强酣的相对表达量明显较低。黄 化苗去黄化过程中三个。吣乃相对表达量在茎中均呈下降趋势，而o∞丁75朋和 o∞丁耶相对表达量在叶中呈先上升后下降的趋势。 and pETSUMO—CsUGT75E1 rosetta(DE3)，并用IPTG诱导目的蛋白的表达， aJld pETSuMo．CsuGT75E3用IPTG诱导，超声破碎后在上清中有表达。 4．使用亲和树脂对诱导产生的融合蛋白进行纯化，以GA、UDPG作为底物，对 测鉴定酶反应产物。 关键词：茶树uDPG．糖基转移酶基因克隆实时荧光定量原核表达酶活检测 Abstract asthemain of Catechin， tea andthe component most polyphenols imponant metabolitesintea alsothemainchemical secondary todetemlinethe plallt，is component of onthe如nctionof innavonoid quality intea tea．Study keygenes biosyntheticpathway innuenceontea a11d plant，maylaysigllmcaIlt oftea breedingimprov锄ent quality． Itis for c1撕fiedthenavonoids intea basically biosynthesis pathwayplaIlt，which thedirect for indicanting BG UDPG-glycosyltransf